原代细胞和传代细胞有哪些方面的区别？2025/06/04

细胞是生命的基本单位，根据细胞培养方式可以分为原代细胞和传代细胞。原代细胞和传代细胞有各自特点，充分了解它们优缺点，有助于更好的理解两种细胞类型。原代细胞：原代细胞是直接从组织或器官中分离出来的细胞。它的优点在于它们保持着其天然状态，并且保留了大部分的原始基因组。因此比细胞系更能反映体内细胞的真实情况，例如细胞间相互作用和信号通路。原代细胞除了优点之外，也有自己的缺点。原代细胞培养过程有限的生长潜力，在体外培养中通常只能进行有限次数的传代，这限制了它们在长期研究中的应用。还有就是实验结果差异性，

培养基性能特点及其制备介绍2025/05/27

培养基是液体、半固体或固体形式的，含天然或合成成分，用于保证微生物繁殖或保持其活力的物质。培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节，培养基自身质量的优劣、保存是否得当、配制使用是否正确等都直接影响到检测结果的准确性。一、培养基的购置与验收1.购置从培养基自身的质量来看，不同生产厂家的产品，甚至同一厂家不同批号的产品都会存在差异。依据ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》，对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商，这是培养基购买过程中重要的步骤。应选择产品市场信誉

间接法和夹心法 ELSIA结果判断方法2025/05/19

ELISA定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性具定量意义。在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在

实时荧光定量PCR（ qPCR）探针类方法具体表现2025/05/14

实时荧光定量PCR（Real-timeQuantitativePCR,qPCR）的化学原理主要包括两种类型：探针类和非探针类。其中，探针类方法具体包括：TaqMan探针法：原理：在PCR反应体系中，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。探针两端分别标记一个荧光报告基团和一个淬灭基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR仪检测不到荧光信号；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，实现

ELISA实验洗板操作关键环节盘点2025/05/07

优化ELISA的重点之一在于洗涤。洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。在做ELISA实验时，洗板有两种方法：手工法洗板和洗板机洗板。二者没有本质的差别，只要操作合乎要求，均能得到正确、可靠的结果。手工洗板-重点:手工洗板人为因素比较大，实验人员必须经验丰富，洗涤次数要足够，冲击力又不要太大，加入的洗液量以刚满反应孔为限，防止孔口内有游离酶未能洗净，同

细胞适应无血清培养基具体分析2025/04/28

血清是细胞培养中重要的添加剂，提供了细胞生产所需的很多营养物质，包括蛋白质，生长因子，脂类，激素等等。然而，由于血清的成分比较复杂且无法测定，并且不同批次血清成分差异较大，使用无血清培养基可以很好的弥补使用血清带来的一些问题，也为实验的标准化和重复性带来很大的帮助。一、无血清培养基的分类无血清培养基的发展经历了包括无血清来源，无动物来源，无蛋白和化学成分限定几个阶段。无血清培养基在发展中逐渐摆脱对天然血清和动物源成分的依赖，在成分上更加的精准，明确和标准化，也可以避免外源物的污染，在生命科学领域

生化试剂性能评价方法2025/04/15

生化试剂性能评价方法：一、主要性能指标1.稳定性：指在规定条件下经过一段时间的保存，仍能达到相应的性能指标，如试剂空白吸光度、线性范围、灵敏度等。2.反应灵敏度：指单位浓度(或活性)的测定物反应所产生的反应度，反应度越高，灵敏度越大。3.精密度：结果间相互符合的一致程度4.准确度：与参考测定程序结果的一致性5.线性范围：在规定的重复性和线性偏差下，测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值之间的比例关系的范围。6.基质效应：基质指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，

PCR反应模板核酸的提取方法2025/04/09

PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA序列。其基本步骤是，首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链，DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在dNTPs和Taq酶存在时，就可以合成模板DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸-变性-退火-延伸的循环可以重复多次，使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质

ELISA检测样本细胞收集处理2025/04/01

利用ELISA（酶联免疫吸附测定）进行检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面整理了常见细胞样本处理方法供大家参考。一、如何选择细胞样本收集方式：细胞样本根据目的物所在部位可选择细胞裂解液或细胞培养上清作为样本。-目的物是分泌型，主要在胞外，即可选择细胞培养上清作为样本，细胞培养上清处理方法相对简单，取细胞培养上清，10

细胞冻存实验必看干货分享2025/03/24

一、实验原理细胞冻存随着温度降低，细胞内的酶活性会逐渐降低，到-80℃左右，酶活性几乎为0，代谢活动停止，可以实现长期保存。然而，随着温度降低，细胞内外的水分也会“结冰”并形成冰晶，冰晶能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。因此常加入冷冻保护剂甘油或二甲基亚砜（DMSO）。DMSO能快速穿透细胞膜进入细胞，降低冰点，延缓冻存过程，同时增加细胞膜的通透性，提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而达到保护细胞的目的。二、实验前准备1.细胞

实验室微生物菌种的分离纯化方法2025/03/17

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。1、用固体培养基分离和纯化单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，

实验中抗体的具体作用功能是什么？2025/03/11

抗体是一种由浆细胞（效应B细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个特征，该外来目标被称为抗原。1.做流式的抗体和免疫组化的抗体是一样的吗?不一定能通用。流式是用直接标记还是间接标记?如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。如果恰好你的免疫组化，也是想用荧光素标记的抗体来直接标记，那就可以通用。如果你的免疫组化要用其它的标记的话，或者

酶联免疫吸附试验（ELISA）出现灰区结果分析2025/03/04

酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。它是应用最多的一种免疫酶技术。ELISA测定的阳性判断值,通常是将大量阴性和阳性人群的测定数据进行统计分析后确定的,其确定依据为判断结果的假阳性和假阴性率最di。在阳性判断值周围一定范围内之外的测定结果可归为可疑,亦即ELISA测定的“灰区"。“灰区"的大小可用统计学方法确定。测定结果处于“灰区"的样

ELISA试剂盒曲线问题解析2025/02/25

ELISA试剂盒试验标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果，甚至是关系到实验的成败。下面将影响ELISA试剂盒曲线问题的原因做了总结：一OD值不正常的可能原因是：1、试剂盒未回温，试剂盒回温到25℃；2、温度控制不好，控制正确温度；3、孵育时间不准确，控制孵育时间；4、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加，洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干；5、阳光直射，对着风直接吹，避风避光；6、酶标仪的波长错误，酶标仪的波长450nm；7、抗体的稀释错误，正确的稀释抗体；8、水质问题，用娃哈哈

聚合酶链反应(PCR)实验问题解析2025/02/18

聚合酶链反应(PCR)技术是在体外进行的由引物介导的酶促DNA扩增反应。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四种脱氧核糖核苷酸(dNTP)及适当浓度的Mg2+存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的体外酶促合成反应。两个引物分别位于靶序列两端，同两条模板的3’端互补，由此限定扩增片段。PCR反应由一系列的变性→退火→延伸反复循环构成，即在高温下模板双链DNA变性解链，然后在较低温度下同过量引物退火，再在适中温度下由DNA聚合酶催化进行延伸。理论上，经过N次循环可使特定片段扩增到2n-1，考虑到扩增

影响ELISA检测试剂盒实验结果的干扰物质有哪些？2025/02/14

血清是常用的ELISA检测试剂盒实验标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种。一、内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。1、类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕捉抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致

微生物菌种的临时存放及活化综述2025/02/06

菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。一、一般菌种临时存放及活化1.低温保存管应存放于－20℃~－80℃之低温条件下。2.准备37℃之70﹪酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架，液面不可高达管塞。3.将低温保

微生物实验室培养基的制备及性能测试2025/01/21

培养基是液体、半固体或固体形式的，含天然或合成成分，用于保证微生物繁殖或保持其活力的物质。培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节，培养基自身质量的优劣、保存是否得当、配制使用是否正确等都直接影响到检测结果的准确性。公司对微生物实验室在培养基购置、贮存、制备、使用等方面应采取的质量控制措施进行讨论，提一些建议。希望有助于微生物检测工作的同行们更好的开展工作。一、培养基的购置与验收1.购置从培养基自身的质量来看，不同生产厂家的产品，甚至同一厂家不同批号的产品都会存在差异。依据ISO/IE

微生物培养基灭菌方法介绍2025/01/14

培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。灭菌的方法，通常可以分为四大类：1、加热灭菌：包括直接灼烧灭菌、干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌和煮沸消毒；2、过滤去菌；3、射线灭菌和消毒；4、化学药剂灭菌和消毒。在本实验中，介绍与培养基和玻璃器材灭菌有关的部份灭菌方法。1.干热灭菌法（即热空气灭菌法）干热灭菌一般是利用电热烘箱作为干热灭菌器。前面所包装好的玻璃器皿，如带棉塞的三角瓶，试管、包装好的吸管、培养皿等，放入电

RT-PCR反应体系灵敏度及特异性提高指导2025/01/07

RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)，也称为逆转录PCR，是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。RT-PCR实验需要追求一致性（稳定性），不管RNA上样量如何，反转录的效率都保持一致，确保cDNA的差异能够真实反映mRNA的差异。在进行RT反应之前，考虑以下几个方面，可以更好地进行RT-PCR实验。一、增加反应体系的灵敏度：1.分离高质量RNA：成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的