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乳果糖检测不再是难题，安谱实验助力复原乳鉴定

阅读：1645 发布时间：2019-3-4

　生鲜乳、灭菌乳、复原乳、国产奶、进口奶，市面上各式各样的乳制品已让人眼花缭乱。消费者或许对乳制品的分类不甚了解也不太在意，然而怎么选一款好牛奶却是大家始终关心的问题，今天我们特意来聊聊复原乳。
　A：近保健品质量乱象频频被曝，感觉走亲访友还是送乳制品比较放心，但是市面上乳制品品牌众多，我们也不太清楚如何区分哪些乳制品中添加了复原乳？
　B：NY/T 939-2016“巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定”中指出可以通过乳果糖含量来判断巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中是否添加复原乳。
　C：2018年2月发布的国家食品安全标准关于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、和复原乳鉴定次讨论稿中灭菌乳标准中乳果糖含量作为理化指标被要求；复原乳鉴定标准中完善了乳果糖测定方法中的试剂配制。
　D：那么到底如何测定乳果糖来鉴定复原乳呢？

　聚光科技（杭州）股份有限公司下属子公司上海安谱实验科技股份有限公司（以下简称“安谱实验”）利用快速检测试剂盒的方法对乳果糖进行检测并提供全套解决方案和试剂耗材。
配套产品，一键采购试剂盒，解决繁琐采购
　搭配乳果糖和D- 果糖分析物标准物质；
　试剂盒满足50次检测，避免拼凑购买造成的浪费；
　提供试剂盒内试剂的单独购买；
方便、快捷、省时
　直接提供预配置的测试液，避免繁琐的配制；
　试剂盒方法原理同NYT 939-2016；
　和NY/T 939-2016方法相比，试剂盒方法节省3h，完成反应仅需2h；
　Megazyme Mega-CalcTM一键数据处理，准确、方便；
安谱实验提供人性化选购、咨询、售后等客户体验服务
　吸光度不稳定、平行性不好、数据准确度不高、实验细节把握不好，通通不是问题，安谱实验资深技术人员手把手指导和解答。

检测方法介绍

一、样品前处理
　取某品牌市售纯牛奶（记为原奶），并将其分别稀释2倍，5倍，10倍（记为原奶*2，原奶*5，原奶*10）待取用；分别取原奶、原奶*2，原奶*5，原奶*10、和100 ppm标准品各0.5 mL于1.5 mL离心管中，加入0.2 mL磷酸钠缓冲液、0.7 mL去离子水、0.05 mL硫酸锌溶液、0.05 mL亚铁氰化钾溶液，混合均匀，在13000转速下离心10 min，沉淀牛奶中的蛋白质和脂肪，吸取上清液进行实验。
注意事项：
　离心后溶液应该为澄清的溶液，否则建议稀释样品或者再分别加入0.05 mL沉淀试剂：硫酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液（为避免误差，加入沉淀剂的情况也请考虑沉淀剂对样品的稀释影响）；
　样品沉淀以后应该为澄清的溶液，取上清液时注意不要将沉淀吸入。

检测样品包括：

样品	原奶		原奶*2		原奶*5		原奶*10		100ppm标品
	两个平行样		两个平行样		两个平行样		两个平行样		两个平行样
编号	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J
	A空白	B空白	C空白	D空白	E空白	F空白	G空白	H空白	I空白	J空白

二、酶解实验
　分别吸取0.5 mL的上清液于1.5 mL的离心管中（其中编号A-J为样品，加入β-半乳糖苷酶进行酶解；A空白-J空白为空白样，不加β-半乳糖苷酶；空白样的目的是扣除空白）。

每个样品分别按照以下步骤进行实验：

添加溶液	添加体积数
添加溶液	A-J 样品	A-J 空白
样品前处理后的上清液	0.50 mL	0.50 mL
乙酸钠缓冲液（0.2 M）	0.10 mL	0.10 mL
去离子水	-	0.05 mL
瓶1（β-半乳糖苷酶）	0.05 mL	-
漩涡混合，并于40℃水浴中反应1小时，然后分别加入以下溶液，每加一个溶液，要盖上螺帽进行漩涡混合。
TEA缓冲液（1 M）/硫酸镁（10 mM）	0.50 mL	0.50 mL
氢氧化钠溶液（0.33 M）	0.05 mL	0.05 mL
辛醇	0.01 mL	0.01 mL
瓶2悬浮液（葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶）	0.05 mL	0.05 mL
30%过氧化氢	0.02 mL	0.02 mL
加完后盖上螺帽于40℃水浴中反应15min，15min后于13000rmp离心10min，取上清液作为酶测试反应。注意：加入过氧化氢后不管是样品还是样品空白会产生气泡，无气泡产生说明实验可能失败。

三、酶测试反应

添加溶液	添加体积数
添加溶液	A-J 样品	A-J 空白
样品酶解实验后的上清液	1.00mL	1.00 mL
瓶3缓冲液	0.05 mL	0.05 mL
瓶4稀释液（NADP+/ATP)	0.05 mL	0.05 mL
将上述溶液分别加入一次性的比色皿中，每加一个溶液盖上比色皿盖子手动摇晃均匀，然后反应3min，在340nm处检测紫外吸光度，读数为A₁，然后加入以下溶液进一步反应。
瓶5悬浮液（HK/G-6-PDH)	0.02 mL	0.02 mL
瓶6悬浮液（6-PGDH)	0.02 mL	0.02 mL
每加一个溶液盖上比色皿盖子手动摇晃均匀，然后反应10min，在340nm处检测紫外吸光度，读数为A₂，然后加入以下溶液进一步反应。
瓶7悬浮液（PGI)	0.02 mL	0.02 mL
加入以上溶液手动摇晃均匀，然后反应15min，在340nm处检测紫外吸光度，读数为A₃。注意：在检测紫外吸光度A₁-A₃过程中，吸光度的大小会在一定范围内波动，波动过大或者不稳定请排查各个实验步骤，找出问题。

四、数据分析
　将测试的数据代入乳果糖试剂盒的Megazyme Mega-CalcTM进行计算（在Megazyme下载），得出检测数据：

样品	原奶		原奶*2		原奶*5		原奶*10		100ppm标品
	两个平行样		两个平行样		两个平行样		两个平行样		两个平行样
编号	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J
计算终浓度（ppm）	474.6	472.2	484.8	487.4	484	499.7	493.7	500.9	97.3	101.6
平均值	473.4		486.1		491.8		497.3		99.5
结论	A3-A2＞1.5，需对样品进行稀释；检测值偏低		样品稀释2倍，5倍，10倍后通过Megazyme Mega-CalcTM进行计算，换算为原奶含乳果糖浓度，相互比较，误差都在2%以内，符合检测要求。						平行样检测的数值与标准样品的浓度相符，平行样差值低于1%。

产品信息

货号	名称	规格	价格
CFHN-K-LACTUL	乳果糖分析试剂盒	50 assays	3104
CFEQ-4-120084-0250	磷酸氢二钠，ACS， ≥99.0%	250g	436
CFEQ-4-120023-0250	磷酸二氢钠一水化合物，ACS，Reag. Ph. Eur.，98.0-102.0%	250g	210
CFEQ-4-198525-1000	无水硫酸镁，≥98.0%，for analysis，粉末状	1kg	463
CFEQ-4-198528-0500	无水乙酸钠，(Reag. Ph. Eur.) ACS，≥99.0%	500g	490
CFEQ-4-111615-0500	三乙醇胺，≥99.0%	500ml	144
CFEQ-4-120033-0250	亚铁氰化钾三水合物，for analysis，98.0%	250g	353
CFEQ-4-120050-0250	硫酸锌七水化合物，ACS，ISO， Reag.Ph Eur，≥99.0%	250g	419
CFEQ-4-120045-0500	氢氧化钠，for analysis ，≥ 97.0%	500g	342
CFEQ-4-531046-0005	1-辛醇，≥98.0%	5mL	88
CFEQ-4-110013-0500	双氧水（过氧化氢）， 27% w/w	500mL	275
AGEQ-2722120	CUVETTES 1.6ml 一次性UV 比色皿，半微量池、100/盒	100/盒	430
AGEQ-2722110	CUVETTES 4.0ml 一次性UV 比色皿、100/盒	100/盒	380

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