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如何正确操作使用蛋白纯化填料?

阅读:734      发布时间:2023-6-26
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  蛋白质是细胞的重要组成部分,对维持生命活动起着至关重要的作用。为了进一步对蛋白质进行研究和利用,需要对其进行纯化,纯化是从混合样品中分离出目标蛋白质的过程。而蛋白纯化填料作为纯化过程中*重要组成部分,起着至关重要的作用,主要是是指用于吸附和分离蛋白质的固相填料,通常包括离子交换树脂、亲和层析树脂、凝胶过滤材料等。其中,离子交换树脂和亲和层析树脂是目前应用广泛的纯化填料。
 
  离子交换树脂是指具有阴、阳离子交换基团的树脂,可以根据蛋白质表面所带的电荷性质,选择相应的阴、阳离子交换树脂进行选择性吸附和分离。离子交换树脂操作简单、效率高、适用范围广,但可能会造成蛋白质结构损伤和纯化效果不理想等问题。
 
  亲和层析树脂则是根据蛋白质的特异性结合性,通过选用匹配的亲和剂进行选择性吸附和分离。比如,亲和层析树脂可以利用抗体来选择性吸附和纯化所需的蛋白质,也可以利用金属离子和His标记来选择性吸附和纯化蛋白质。亲和层析树脂具有选择性强、结构损失小等优点,但成本较高。
 
  除此之外,还有凝胶过滤材料,其通过蛋白质在凝胶孔洞中的分子大小、形状等性质的差异进行选择性纯化。凝胶过滤材料可根据自身需要进行不同孔径的填充,由于对蛋白质的结构影响小,因此也被广泛应用于蛋白质纯化中。
 
  蛋白纯化填料使用时需注意:
 
  1.定期更换缓冲液:选择合适的缓冲液和保护剂,定期更换。
 
  2.定期清洗填料:采用PH调节、超声波、化学法等方法,去除阻塞物和杂质。
 
  3.避免高温、干燥:避免填料暴晒于阳光下,避免高温、干燥造成填料的老化和破坏。
 
  4.避免受力过大:避免填料受到过大的挤压和撞击。
 
  5.定期检查:定期检查填料的状态和性能,避免使用失效或损坏的填料。

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