超微量吸光度分光光度计在与蛋白质分析、提取和纯化相关的实验室和分析机构中无处不在。生物化学和生命科学应用中蛋白质浓度测量的两种技术是 DeNovix 的 DS-11 系列分光光度计/荧光计和赛默飞世尔科技的 NanoDrop™系列仪器。这些分析工具中的每一种都能够实现蛋白质定量和质量测量,并具有出色的检测限。
Thermo Fisher NanoDrop™系列仪器开创了现代微量分析技术,用于测量 1-2 μL 范围内样品中的蛋白质浓度。Thermo Fisher NanoDrop™仪器依靠液体的表面张力,利用光学基座将微量样品拉伸到色谱柱中并进行吸光度测量。
DeNovix DS-11 系列是一款一体化超微量紫外-可见分光光度计和荧光计。该仪器拥有灵敏的紫外-可见光 (UV-Vis) 分析功能,具有全光谱功能,有助于快速测量蛋白质浓度。DS-11 系列采用样品保留原理,称为 Bridge Testing™ 验证,可提高纳米体积蛋白质分析的准确性。
Thermo Fisher NanoDrop™ 技术使用基座测量技术进行蛋白质浓度测量。将样品液滴直接移液到分光光度计的下基座上,当上表面与样品接触时形成色谱柱,然后分开,依靠表面张力保持色谱柱完整性。调整上基座的位置以设置光程(光穿过样品的距离),随后可以使用氙气手电筒和线性电荷耦合器件 (CCD) 阵列光谱仪进行蛋白质浓度测量。
该技术的主要缺点是由于样品柱破损而可能导致错误测量。Thermo Fisher NanoDrop™分光光度计对拉伸样品的依赖对于蛋白质样品来说可能存在问题,因为所使用的缓冲液会产生低表面张力。这导致许多实验室认为微量分析不适合蛋白质定量。
相比之下,DS-11 系列采用 SmartPath™ 技术设计,并经过 Bridge Testing 验证。与拉伸样品相比,这种测量系统可以压缩样品,并且不依赖于样品表面张力。它还可以原位检测并自动补偿未桥接的样品条件,确保蛋白质浓度结果的准确性。
DS-11 FX+ 配备了三种不同的测量模式,适用于蛋白质浓度测量,包括:纯化蛋白质;细胞和组织提取物以及低浓度样品。这些模式是:
蛋白质 A280:使用紫外-可见光扫描并测量 280 nm 处的蛋白质吸光度
比色法:使用 Bradford、BCA 和 Pierce 660 等常见分析方法测量蛋白质浓度
荧光蛋白检测:用于灵敏和特异性的蛋白定量
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