测量蛋白质的紫外光吸收是微量蛋白质浓度和纯度分析最直接的方法。芳香族氨基酸和许多蛋白质的残基表现出很强的紫外线吸收，在 280nm 处达到峰值。吸收的光量与样品的浓度成正比。使用 Beer-Lambert 方程，可以将蛋白质量化为这种吸收行为的一个因素。

直接 UV 吸光度测量是一种简单有效的纯化蛋白质方法，但它们并不是通用的定量方法。相反，分光光度法技术必须根据对分析物的理解以及样品中是否存在可能干扰 280nm 直接定量的缓冲液或溶剂进行定制。

本文将探讨用于蛋白质微量分析和生物化学应用的四种替代蛋白质定量分析。

二辛可宁酸 （BCA）

BCA 或 Smith 测定法是一种比色测定法，专为分析溶液中的蛋白质样品而设计。在分光光度法分析之前，蛋白质与铜离子结合形成铜-二辛可宁酸 （Cu-BCA） 螯合物;一种紫色复合物，在色度强度和蛋白质浓度之间具有线性相关性。这种复合物可吸收 562nm 的光，并与去污剂兼容。

Bradford 检测

Bradford 分析是用于微量分析的相对成熟的比色蛋白质定量工具之一。它基于带正电荷的蛋白质与带负电荷的考马斯染料的结合。该复合物吸收 595nm 的光。然后可以将吸光度光谱与标准曲线进行比较，以确定蛋白质浓度。

Lowry 微量分析

改良的 Lowry 分析是一种铜基试剂，可在 650nm 波长下测量铜-蛋白质复合物的吸光度。与 Bradford 测定一样，必须通过与测定标准曲线进行比较来估计结果。

皮尔斯 660

Pierce 660 分析设计用于对与染料-金属复合物结合的蛋白质进行微量分析。它与包含去污剂和还原剂的溶液兼容，在 660nm 的波长处表现出吸收。

使用 DeNovix 进行微量分析

DS-11 系列分光光度计可在整个紫外-可见光谱范围内进行吸光度测量，使用 280nm 吸光度和市场上最常见的比色分析方法进行直接定量，能够对蛋白质样品进行微量分析。标准曲线功能增强了这一点，该功能绘制 2 – 8 条标准曲线，用于吸光度值的快速比较分析。DS-11 特别适用于定量低至 1 μL （μl） 样品体积的 BSA、IgG 和定制蛋白质，并全面实施上述蛋白质检测。