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重组人GDF3影响表达的因素和解决方法
2021-8-5 阅读(284)
细胞因子是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节固有免疫和适应性免疫等多种功能。细胞因子是由多种细胞产生的，具有广泛调节细胞功能作用的多肽分子， 细胞因子不仅作用于免疫系统和造血系统，还广泛作用于神经、内分泌系统，对细胞间相互作用、细胞的增殖分化和效应功能有重要的调节作用。
重组人GDF3重组要求：
1. 真实性：重组蛋白产品一致经过N末端氨基酸序列分析；必要时应用SDS-PAGE, RP-HPLC和质谱(MS)检测其真实性。
2. 纯度：应用两种方法分析产品纯度。
3. 生物活性：进行相应的体外或体内活性检测。
4. 蛋白含量：通过紫外光谱分析，电泳检测；必要时应用HPLC定量标准蛋白溶液。
5. 内毒素：kinetic LAL法检测内毒素。
6. 微生物：重组蛋白在装瓶之前都经过滤除菌处理。
重组人GDF3影响表达的因素和解决方法：
影响蛋白原核表达的因素很多，如蛋白的亲水性、密码子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性过强，就难以表达；稀有密码子过多或多个稀有密码子连在一起也难以表达。首先要分析你的蛋白序列和二级结构，看看是否存在这些影响因素。如果必须要表达全长蛋白，像这种情况难度就比较大，可以进行密码子的改造，或者更换载体，或者更换宿主菌。看试验的目的，如果不需要表达全长蛋白，如表达部分抗原性强的片段，可以简单一点，表达部分片段即可。
