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重组人Flt3L表达出来的蛋白为什么比实际要小
2021-5-10 阅读(1036)
重组人Flt3L是一种膜蛋白，能够刺激早期造血的细胞因子。在体、离体试验均证实，可调节非红系造血干/祖细胞的增殖和分化，与多种细胞因子协同，可促进前B淋巴细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞、细胞毒T淋巴细胞的增殖、分化和成熟，从而具有重要的抗肿瘤作用。本产品由真核细胞表达的重组蛋白，是将蛋白基因接入稳定表达载体，转化CHO-K1细胞，经克隆筛选，质量验证，挑选的稳定表达株，由化学成分确定的培养基发酵制备，工艺稳定，保证了产品质量及批次间的一致性。
重组人Flt3L表达出来的蛋白比实际要小是因为：
1、蛋白本身被降解了，可以存在一些不利于该蛋白稳定的蛋白酶
2、翻译起始位点的问题：如果一个类似于核糖体结合位点的序列加上适当的间隔序列出现在了ATG密码子上游，降解就会有可能出现。解决的方法可以采用两端都带有融合标签的载体，全长蛋白就可以通过提高咪唑浓度，在洗脱时将截短蛋白与全长蛋白区分开。或者在蛋白两端采用不同标签，进而通过亲和纯化的方式得到全长蛋白。
3、影响蛋白稳定性的另外一个因素是与N端Met相邻的氨基酸，即N端原则，当下列氨基酸出现在N端时:蛋白的半衰期较短，蛋白会存在不稳定降解的问题，当它出现在第二个位置上时，蛋白极度不稳定。
重组人Flt3L采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中Flt3L的含量。预先包被的抗体和检测相抗体都是Flt3L单克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人Flt3L呈正相关。
