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真核细胞培养时支原体污染表现以及解决方式
2020-12-8 阅读(491)
支原体是一种特殊的微生物，在哺乳动物（包括人类）、爬行动物、昆虫和植物中广泛分布。它是小、较为简单的可自我复制的原核生物，大小仅为0.2-0.8um。支原体的基因组仅为0.58-2.20Mb，其自身生物合成能力有限，因此大部分营养物质都要依赖于宿主。
在真核细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。细胞培养中常遇见的有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染等。说起支原体污染，估计细胞培养的同学就开始犯愁了，细胞培养的老手都知道，支原体污染非常不易察觉。有的实验室被支原体污染后，如果不进行有效*的支原体清除，该实验的细胞培养很难进行下去，细胞传代3代以后状态就急剧下滑，无法进行正常实验，有的实验室甚至只能指望换细胞间。
真核细胞培养时支原体污染表现
细胞形态改变，一般是有梭形变成圆形，不再贴壁生长，漂浮
光镜下，可以看到细胞膜上吸附很多圆点，40*16倍下约有0.1mm，分布多集中于细胞核周围和细胞边缘，中间部位较少
消化时可以看到圆点从细胞膜上游离出来，很多，还会动
细胞培养液变碱，有大量小黑点游离
解决方法
①添加抗支原体剂量的pbs或者其他平衡盐液进行润洗，然后消化
②常规离心，用添加抗支原体（沙星类较为有效）的*培养液重悬，植入新的培养瓶
③培养并且密切观察（抗支原体推荐使用的浓度及时间如下）
恩诺沙星25μ/ml，治疗时间一周；
环丙沙星10μ/ml，治疗时间两周；
司氟沙星10μ/ml，治疗时间一周；
治疗时间满后撤药换用普通双抗培养基或者无抗培养基，另外特别说明因为以上药物均抗G+-，所以添加的时候不需要再添加常规双抗。
