精品啪啪一级免费视频 镍比色测定试剂盒--定量检测多种样本类型中的Ni²

镍是地壳中最为常见的金属元素之一，仅次于铁。  

许多酶利用镍作为活性位点的一部分，包括单核（如甘油醛酶I、超氧化物歧化酶）、双核（如脲酶）或更复杂的异核簇（如几种氢化酶和脱氢酶）。我们利用镍与含有巯基的化合物形成络合物的能力，这些化合物在紫外/可见光区域具有吸收带。AkrivisBio的镍检测试剂盒是一种简单、灵敏的方法，可用于定量检测多种样本类型中的Ni²⁺。由于其他离子也表现出与含硫化学物质相似的行为，因此采用差分吸光度法来校正干扰物质。

艾美捷镍比色测定试剂盒：

货号：MA-0134

规格：100孔

样本类型：包括细胞和组织培养上清液、尿液、血浆、血清以及许多其他生物液体在内的多种样本。

检测方法：比色法，吸光度330纳米和405纳米

检测类型：定量检测

应用：一种基于微孔板的简单、灵敏的比色法检测方法，用于在多种样本中定量检测Ni²⁺，线性检测范围为样本中2-50纳摩尔镍。

灵敏度：样本中镍的线性检测范围为2-50纳摩尔。

储存条件：室温

运输温度：室温

保质期：自发货之日起一年

镍比色测定试剂盒检测原理：

在硼酸盐缓冲液中，镍与巯基乙醇形成络合物，在330纳米处产生强烈的吸收带。如果存在铁和/或钴，它们也会在330纳米和405纳米处表现出差分吸收，这些吸收用于校正它们的影响。镁、铜和锌不会产生干扰。

检测试剂：

-检测缓冲液：20毫升  

-镍试剂：1毫升（绿色）  

-氯化镍：1毫升（黄色）  

储存和处理：

-检测缓冲液和镍试剂：即用型，室温保存。  

-镍标准品：以1毫摩尔/升溶液形式提供，即用型，室温保存。

检测步骤：

1. 标准曲线：在96孔板的一系列孔中分别加入0、10、20、30、40、50微升镍标准品。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至200微升。标准品浓度分别为0、10、20、30、40、50纳摩尔镍。

2. 样本准备：镍的浓度可能变化范围较广。加入10-100微升每个样本，并用检测缓冲液将所有测试孔的体积调整至200微升。样本读数应位于标准曲线范围内。如果任何样本超出该范围，适当稀释并重新检测。  

注意：如果样本中没有或极少含有铁或钴污染，只需在405纳米处读取吸光度。如果样本中预期含有铁或钴，需在加入镍试剂之前和之后，分别在330纳米和405纳米处读取样本吸光度。

3. 读取1：在加入镍试剂之前，读取样本和标准品在330纳米和405纳米处的吸光度。任何吸光度仅由Fe²⁺和/或试剂背景引起。将这些测量值分别记作OD3301和OD4051。

4. 络合物形成：向所有标准品和样本孔中加入10微升镍试剂，允许30分钟用于络合物形成和颜色发展。

5. 读取2：再次读取所有样本和标准品在330纳米和405纳米处的吸光度。将这些测量值分别记作OD3302和OD4052。

6. 在没有铁或钴离子的情况下测定镍：从405纳米处的读取2（OD4052）中减去405纳米处的读取1（OD4051）。绘制标准曲线。确定标准曲线的斜率（OD/纳摩尔）。将样本的ΔOD405（OD4052 - OD4051）除以标准曲线的斜率，以确定镍的纳摩尔数。

7. 在存在铁和/或钴的情况下测定镍：从所有标准品和样本读数中减去0镍的OD读数。

- a. 校正330纳米处因铁引起的干扰：在没有巯基乙醇的情况下，330纳米处的吸光度（OD3301）仅由Fe²⁺贡献。加入含有巯基乙醇的镍试剂后，Fe²⁺对OD3302的贡献按以下方式计算：计算OD3302 = 1.82 × OD3301。从总测量的OD3302中减去因铁导致的计算OD3302值，以获得因镍和钴导致的校正OD330。

- b. 校正405纳米处因铁引起的干扰：在没有巯基乙醇的情况下，405纳米处的吸光度（OD4051）仅由铁贡献。加入含有巯基乙醇的镍试剂后，铁对OD4052的贡献可以按以下方式计算：计算OD4052 = 1.65 × OD4051。从总测量的OD4052读数中减去因铁导致的计算OD4052值，以获得仅因镍和钴导致的校正OD405读数。

- c. 校正因钴导致的干扰：计算校正后的OD330和OD405的比值 =（校正后的OD330/校正后的OD405）。该比值将从100%钴贡献吸光度时的0.925变化到100%镍贡献时的2.8125。从校正后的读数比值中减去0.925，并将该结果除以1.8875，{[（OD330/OD405）- 0.925)]/1.8875}。这就是因镍导致的吸光度百分比。将该百分比乘以校正后的OD330，以获得样本中OD3302处的孤立镍吸光度。

8.计算：绘制标准曲线（ΔOD405或ΔOD330）。确定标准曲线的斜率。计算步骤6中没有铁或钴的样本的样本镍读数ΔOD405，或步骤7中有铁和/或钴干扰的样本的校正OD330。将校正后的样本镍读数除以标准曲线的斜率，以确定孔中镍的纳摩尔数。