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采用PCR或等温扩增的方法来扩增DNA(或RNA)时,反应温度在50℃以上,反应体积介于10-100ul之间,并且可能需要在样品上覆盖一层油性物质或采取相似的封闭操作。这是因为,在反应的过程中伴随的蒸发现象致使反应体积不可过小,另一方面,较大的反应体积会消耗更多的耗材,并且在循环扩增过程中无法有效的进行温度控制(达到预定的温度需要较长的时间)。TwistDx’s提出的重组酶聚合酶扩增(RPA)技术对这一难题给出了解决方案。重组酶聚合酶扩增反应可在低温(通常在37-42℃,可以在更低温度下进行)下
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一、pH的定义溶液的酸碱性可用[H+]或[OH-]来表示,习惯上常用[H+]来表示。因此溶液的酸度就是指溶液中[H+]的大小。对于很稀的溶液,用[H+]来表示溶液的酸碱性往往既有小数又有负指数,使用不方便,因此常用pH值来表示溶液的酸碱性。pH值是指氢离子浓度的负对数,即pH=一lg[H+]例如:[H+]=10一7mol/L,pH=7;[H+]=10一9mol/L,pH=9;[H+]=10一3mol/L,Ph=3。pH值的使用范围一般在0~14之间。pH值越小,溶液的酸性越强,碱性越弱;pH值越
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采用CRISPR/Cas9介导敲入技术构建可量化生产蛋白质的稳定细胞系从植物标本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步骤非常严格。动物尸体DNA的提取方法和DNA文库制备方法的改进,已经能够有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德国科学家RafalM.Gutaker等将这些改进方法应用到植物标本的DNA提取,并通过测序评估提取性能,该方法能够对DNA片段长度的分布进行准确评估。与使用十六烷基*基溴化铵(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)缓冲液提取的中间片段长
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PCR反应的特点是具有较大扩增能力与*的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、标本交叉污染源:收集标本的容器:标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;吸样枪:标本核酸模板在提取过程中,由于污染导致标本间污染;气溶胶:zui可能造成PCR产物污染的形式。在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由其造成的
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从植物标本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步骤非常严格。动物尸体DNA的提取方法和DNA文库制备方法的改进,已经能够有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德国科学家RafalM.Gutaker等将这些改进方法应用到植物标本的DNA提取,并通过测序评估提取性能,该方法能够对DNA片段长度的分布进行准确评估。与使用十六烷基*基溴化铵(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)缓冲液提取的中间片段长度减少35%,改进DNA与硅膜的结合条件可以额外减少10%。他们并未观
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TaqMan探针作为阻断剂参与突变基因的PCR扩增和DNA熔解分析含TaqMan探针的非对称PCR以及DNA熔解分析被应用于突变检测,可有效用于临床诊断。该方法简单、成本低,在一个封闭的离心管中进行,可zui大限度的减少反应时间,减轻工作量,以及避免样品间的交叉污染。尽管DNA熔解分析比DNA常规测序更加灵敏(两者的突变检测阈值分别为~5%和15%~20%),但相比与那些工作量大且昂贵的生物技术,如焦磷酸测序和微滴型数字PCR而言,其灵敏度相差甚远。IrinaV.Botezatu等科学家证明,在
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一、化学分类:1.天然培养基,指一类利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。2.组合培养基,又称为合成培养基或综合培养基,是一类按微生物的营养要求设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。3.半组合培养基,指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如,马铃薯蔗糖培养基。二、物理分类:1.固体培养基,一类外观呈固态的培养基。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。2.液体培养基,一类呈液态的培养基。3
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分层细胞膜微区调节细胞因子信号传导从而影响受体二聚体的稳定性
信号分子复合物动力学的结果显示,信号分子复合物是调控细胞免疫特异性的关键。ChangjiangYou等科学家提出了一种实验结合计算的研究方法,通过对细胞膜微区测量结果的量化构建了I型干扰素受体复合物动力学。通过长期的双色量子点(QD)示踪,他们发现单个由配体诱导产生的受体异源二聚体的寿命取决于细胞膜骨架(MSK)的完整性,这一点被证明对有效的下游信号也是至关重要的。通过成对关联示踪,定位显微镜以及快速量子点示踪,识别了一个在300nm范围内的第二限制。基于实验数据,将一个定量空间随机扩散反应模型