试用 | 引物二聚体太多？检出率低？试试翌圣引物热启动结合蛋白！

在PCR技术的发展历程中，热启动技术的出现无疑是一次革命性突破。常规PCR技术在反应体系配制阶段，由于DNA聚合酶在低温环境下已具备活性，极易与引物、模板发生非特异性结合，从而产生非特异性扩增产物和引物二聚体。这些“副产物”不仅干扰目标产物的扩增，还会严重降低实验结果的准确性与可靠性，导致后续数据分析出现偏差甚至错误。

热启动技术通过的温度依赖性激活机制，从根源上解决了这一难题。在反应体系配制时，借助物理或化学修饰手段，暂时“冻结”DNA聚合酶的活性，使其无法在低温下启动扩增反应。直到反应温度升至特定阈值，聚合酶的活性才被精准释放，开始特异性地识别并结合目标模板，进行高效、准确的DNA扩增。这种精准的温度控制，规避了低温环境下的非特异性条带和引物二聚体的生成，显著提升了PCR反应的特异性。正因如此，热启动PCR已成为提升PCR特异性的金标准，但传统热启动技术需针对特定DNA聚合酶筛选适配体或抗体，存在研发周期长、操作繁琐等局限。

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相比之下，引物封闭热启动技术独辟蹊径，不再聚焦于聚合酶活性“冻结”，而是通过高亲和性DNA结合蛋白精准捕获引物，从根本上突破了传统技术依赖聚合酶修饰的桎梏。基于引物封闭原理，从源头上阻断引物间的错误结合，解决传统PCR中引物二聚体形成以及非特异性产物生成的难题。该技术既规避了复杂冗长的筛选流程，又极大提升了热启动技术的应用便捷性与反应特异性，为PCR技术的高效、精准应用开辟了新路径。

图1. 引物封闭热启动技术在PCR扩增技术中的原理图示意^[2]

HotStart-Primer Binding Protein (Cat#14563)

翌圣生物全新研发的HotStart-Primer Binding Protein (Cat#14563)能够在低温下可与引物结合，将引物与Taq DNA聚合酶有效隔离，使其无法被聚合酶利用，从而高效抑制低温条件下非特异性引物延伸产物及引物二聚体的形成，能够显著提升PCR反应的特异性和扩增效率。

通过对比实验评估翌圣生物HotStart-Primer Binding Protein与进口品牌Supplier A同类产品对PCR反应中引物二聚体的抑制效果。结果显示，两种产品均能有效减少引物二聚体形成，并显著提高目标序列的扩增效率，表明热启动蛋白技术可显著改善PCR反应特异性。

图2. 翌圣HotStart-Primer Binding Protein提升PCR反应特异性数据展示

参考文献：

[1] Paul N, Shum J, Le T. Hot start PCR[M]//RT-PCR Protocols: Second Edition. Totowa, NJ: Humana Press, 2010: 301-318.

[2] Kubu C J. HotStart-IT®: A novel hot start PCR method based on primer sequestration[J]. BioTechniques, 2008, 44(2): 275-277.