精品视频一区二区三区 啤酒中五种氯苯酚类化合物的快速液相色谱分析

前言根据 GB/T 4927 的规定，啤酒是以麦芽、水为主要原料，加啤酒花，经酵母发酵酿制而成的酒类制品。成品啤酒由丰富的物质组成，包含酯类、醇类、酚类、氨基酸等，其中酚类化合物在啤酒中扮演重要角色。特定而言，在生产、运输、贮藏、使用等阶段，酚类物质可能与含氯的水、容器和空气等接触，发生化学反应，生成具有特殊味道的氯苯酚类物质，使啤酒产生消毒水、臭味等味道，导致啤酒口感变化；同时，氯苯酚类物质本身也具有一定的毒性，对人体有致癌性、致畸性[1]。因此，全流程密切监测啤酒中的氯苯酚类化合物对于保证啤酒的品质和安全性至关重要。氯苯酚类化合物是一类含氯的苯酚衍生物，根据氯元素在苯环上的位置、取代数量等的不同，包括多达十几种化合物。通常检测的几种含氯苯酚化合物包括邻氯苯酚、2,4-二氯苯酚、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚，可用分析方法主要有液相色谱法[2,3] 和液质联用方法、气相色谱法和气质联用方法。由于氯苯酚类化合物极性大、难电离，采用气相色谱和气质联用方法进行分析时，一般需要在样品前处理中对目标化合物进行衍生，分析难度较高。

液相色谱法和液质联用方法是目前针对氯苯酚类化合物的主要分析技术，有利于简化样品前处理过程，提升分析效率，并实现准确定性和定量。关于液相色谱法测定啤酒中的上述五种氯苯酚类化合物，暂未查到相关文献报道。但用于测定氯苯酚类化合物的液相色谱方法一般采用传统的高效液相色法 (HPLC)，分离效率和分离能力较低，不利于快速分析。本文采用 Agilent 1290 II UHPLC 结合 Poroshell 120Bonus-RP 色谱柱，开发出一种针对五种氯苯酚类化合物的快速分析方法，可准确分离啤酒中的五种氯苯酚类化合物。经过初步方法学验证，该方法适用于准确测定啤酒中的五种氯苯酚类物质。

实验部分试剂和样品甲醇、磷酸为色谱纯，购于迪马公司；所用实验用水为 MilliporeMilli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水；邻氯苯酚、2,4-二氯苯酚、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚购于阿拉丁；样品为市售产品。

仪器和设备采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统 ，配备如下安捷伦模块：四元泵（部件号 G7104A）、自动进样器（部件号 G7167B）、柱温箱（部件号 G7116B）和二极管阵列检测器（部件号 G7117A）。色谱柱选用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 Bonus-RP（4.6 × 100 mm, 2.7 μm；部件号 695968-901）。标准品制备标准品储备液：精密称取邻氯苯酚、2,4-二氯苯酚、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚、2,3,4,6-四氯苯酚各标准物质适量，置于容量瓶中，加甲醇适量，超声使其溶解，然后用甲醇定容至刻度，制得 2000 μg/mL 标准品储备液。标准品工作溶液：取标准品储备液适量，加 50% 甲醇，逐级稀释制得 4 μg/mL、8 μg/mL、16 μg/mL、32 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL 和 160 μg/mL 的标准品工作溶液。

样品前处理取啤酒，打开盖子，缓慢从瓶中倾出部分啤酒至干净的 40 mL 顶空瓶中；轻轻晃动，缓慢除去大量气体；然后将顶空瓶置至超声仪中，超声脱气约 1 min；取脱气后的啤酒，过 0.22 μm 微孔滤膜后上机分析

结果与讨论五种氯苯酚类物质分离结果按照上述实验方法，进样分析空白试剂（50% 甲醇-水）、五种氯苯酚类标准品工作溶液（浓度为 40 μg/mL）和三种啤酒样品溶液，所得五种氯苯酚类化合物的分离结果如图 1 所示。从图中可以看出，空白试剂在氯苯酚类各物质色谱峰对应的保留时间处无干扰；在标准工作溶液中，氯苯酚类各物质色谱峰分离良好；在啤酒样品中，未检出氯苯酚类各物质的色谱峰，且无其他成分干扰。

方法检出限根据 S/N = 3 计算方法检超出限 (LOD)。由于邻氯苯酚和 2,6-二氯苯酚的检测波长为 276 nm，而 2,4-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚的检测波长为 290 nm，因此分别取这两个波长下的噪音来计算各目标化合物的 LOD。结果表明，在 1 μL 进样量、检测波长276 nm 下，邻氯苯酚的 LOD 为 0.196 μg/mL，2,6-二氯苯酚的 LOD 为 0.336 μg/mL；在 1 μL 进样量、检测波长 290 nm 下，2,4-二氯苯酚的 LOD 为 0.121 μg/mL，2,4,6-三氯苯酚的 LOD 为 0.0923 μg/mL，2,3,4,6-四氯苯酚的 LOD 为 0.107 μg/mL。如果分析人员在实际应用中需要获得更低的方法检出限，可以采用增加进样量和换用 60 mm 流通池等措施。

氯苯酚类物质的纯度1290 Infinity 液相色谱系统配置二极管阵列检测器，可以对色谱峰进行全波长扫描，并进行纯度分析。由于在分析的啤酒样品中未检出五种氯酚类物质，因此采用加标样品进行纯度判定。向啤酒样品中添加 5 μg/mL 各氯苯酚类物质，然后进样分析，进行纯度分析处理。结果列于表 3 中。从表中可以看出，四种啤酒加标样品中的五种氯苯酚类物质色谱峰纯度良好，纯度因子均大于0.999，提示各分析物的色谱峰均未受到干扰。

结论本文建立了啤酒中五种氯苯酚类物质的快速分析方法。该方法使五种氯苯酚类物质获得了良好的分离度，初步方法学考察结果（包括分离度、灵敏度、回收率和重复性等指标）表明，该方法符合液相色谱定性和定量分析的要求。该方法采用 Poroshell 120 核壳工艺色谱柱，可以在较低的柱压下获得较高的柱效，同时实现快速分离。该色谱柱与同规格、相同键合相的全多孔亚 2 μm 色谱柱相比，柱效达到亚 2 μm 柱的90%，但是柱压仅为亚 2 μm 柱的 40%–50%。因此，借助该色谱柱，该方法可实现低压、快速分离，在 10 min 内即可完成对五种氯苯酚类物质的分析。由于氯苯酚类物质具有防腐、杀菌、杀虫、防霉作用，因此在环境、纺织、印染、家具等行业也有广泛应用，且由于其对人体的毒性而受到严格监管。在排除干扰物质的前提下，本文所述的方法也有望作为这些行业中监测氯苯酚类化合物的参考方法。