荧光滤光片的选型要点:
1. 荧光染料匹配
激发波长:滤光片的中心波长需与染料的最大激发波长一致。
发射波长:滤光片的带宽需覆盖染料的发射光谱,同时避免与其他染料重叠。
案例:
FITC(异硫氰酸荧光素):激发波长495 nm,发射波长519 nm。
激发滤光片:480/40 nm(中心波长480 nm,带宽40 nm)。
发射滤光片:535/30 nm。
2. 系统兼容性
光路设计:
显微镜:需考虑物镜数值孔径(NA)和滤光片安装方式(转盘式、滑块式)。
流式细胞仪:需与激光波长(如488 nm、633 nm)匹配。
尺寸与接口:
显微镜滤光片:直径通常为25 mm或圆形(如φ25.4 mm)。
流式细胞仪滤光片:多为方形或定制尺寸。
3. 性能参数
透射率:优质滤光片透射率应>90%(中心波长处)。
截止深度:OD>6可有效阻挡杂散光。
温度稳定性:高温环境下(如激光照射)需选择耐热材料(如熔融石英)。
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