【瑞士步琦】【应用】同一系统上使用Flash和制备HPLC色谱纯化多肽

同一系统上使用
Flash和制备HPLC色谱纯化多肽
色谱应用
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简介
固相多肽合成(SPPS)是科学研究、临床和商业合成领域常见的多肽合成路径。由于反应通常产生多种长度的肽链,所以这些反应混合物的提纯非常具有挑战性。使用大孔反相填料色谱柱和制备 HPLC 能够得到高纯度的结果,所以常用于此类纯化。不过,多肽反应通常很复杂,含有很多杂质。将此样品引入昂贵的制备 HPLC 柱和系统中会产生额外的消耗,而且需要较多时间进行样品纯化。Pure Prep 系统既能运行制备 HPLC 也能运行 Flash 色谱模式,令您从容选择使用制备 HPLC 还是更经济的 Flash 色谱。FlashPure 大孔 Flash 柱填装高效的 20μm 粒径的填料,分离度高,这是分离很靠近的化合物分子诸如多肽等特别需要的。在此我们证明,如何在同一系统上使用 FlashPure Flash 柱和 HPLC 柱纯化复杂的多肽反应物,并使最终纯度超过95%。
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实验材料和方法
样品 | 样品1(Flash色谱) | 样品2(制备HPLC) |
多肽混合物 | 25mg 反应混合物 | 15mg 反应混合物 |
目标多肽链长 | 20 个氨基酸 | 15 个氨基酸 |
多肽序列 | CQQYNRPYXXXGGTKLEIKR-NH2 | CAKHYYYGGXXXMDY-NH2 |
纯化 | Flash 色谱 | Prep 色谱 |
仪器系统 | Pure flash 模式 | Pure Prep 模式 |
Flash 柱芯/色谱柱 | FlashPure WP C18 12g | Vydac 150HC,22×150mm,10um |
梯度/检测器 | A=水 B=乙腈+0.1%TFA | A=水 B=乙腈+0.1%TFA |
进样模式 | 液体进样 | 液体进样 |
分析 | 分析型 HPLC |
系统 | Agilent 1200 |
色谱柱 | Kromasil C18 100×4.6mm,3um |
流动相 | A=水+0.1%TFA B=20%水,80%乙腈+0.1%TFA |
梯度 | 样品1:20分钟内10-50%B 样品2:20分钟内15-55%B |
检测波长 | UV214nm |
进样模式 | 液体进样-多种进样体积 |
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结果与讨论


纯度结果 | 纯化前纯度 | 纯化后纯度 |
样品1(Flash 色谱纯化) | 58.5% | 95% |
样品2(Prep 色谱纯化) | 55.9% | 98.9% |
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结论
通过以上实验证明:使用反相 Flash 柱和 HPLC 色谱柱,成功地在同一系统上进行了多肽纯化,得到纯度超过 95% 的馏分。高效大孔 Flash 色谱填料提供了堪比制备 HPLC 色谱柱水平的纯度,Pure Prep 系统既能够运行制备 HPLC 也能运行 Flash 色谱模式,您可以自如选择使用制备 HPLC 或更经济的一次性 Flash 色谱柱。
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