精品网站在线免费观看 植物根系活力检测试剂盒（TTC法）实验操作步骤

    植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。

氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲瓒，生成的三苯甲瓒比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。

操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

将根部组织洗净，去除根上的泥土，轻轻擦干，不要过分挤压破坏根系细胞。

2、标准溶液的配制

① 临用前取 10μL 10mg/mL TTC标准液，加入1990μL试剂二，充分混匀，配制成 50μg/mL TTC标准溶液，现用现配。（后续实验需要1000μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

② 取 1mL 50 μg/mL TTC 标准溶液加入到一支试剂三内，充分震荡混匀2min。混匀后加入 1mL 乙酸乙酯，再次充分震荡混匀2min，室温静置分层5min，取上层溶液。

③ 将上层溶液用乙酸乙酯进行稀释，得到20μg/mL标准溶液备用（吸取200μL 50μg/mL TTC加入300μL乙酸乙酯混匀即可）。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至485nm。

② 标准溶液的测定：取 200μL 20μg/mL标准溶液和200μL乙酸乙酯（即0μg/mL）于96孔板(非聚苯乙烯材质)中，分别测定其在485nm处的吸光度，分别记为A标准管、A空白管。计算ΔA标准= A标准管-A空白管。ΔA标准只需做1-2次。

③ 操作表：

4、正式实验：

① 若样品 37℃暗反应未到4h但根系已出现深粉色，此时可以直接进行下一步实验操作；若ΔA测定大于1.5，可以减少样本质量或者缩短反应时间进行实验，计算公式注意修改；

② 若4h暗反应结束后，根系没有出现粉色或者ΔA测定小于0.005，可以延长暗反应时间（8h，16h甚至24h）或者加大样品量，计算公式注意修改。

③ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

④ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

按照样本质量计算根系活力：以TTC的还原量来表示根系活力：

TTC还原强度[ μg TTC/(g·h)] =ΔA测定×C标÷ΔA标准×V÷(W×T)

=5×ΔA测定÷ΔA标准÷W

W：根重，g； C标：标准溶液浓度，20μg/mL；

T：反应时间，4h； V：试剂五的体积即匀浆体积，1mL。

注意事项：

1、试剂五容易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作。

2、如果离心后待测的上清依然浑浊，可尝试加大离心转速或者延长时间，例如15000rpm 4℃离心 20min。