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液相色谱仪厂家介绍液相色谱法测发酵液中阿魏酸和香草酸、醛
香草醛是食品、饮料等工业应用zui广泛的香料之一,还可作为保鲜剂及医药等工业的原材料。香草醛目前主要由化学方法制备,但化学合成制得的香草醛不属于天然香料。生物转化法生产香草醛多采用阿魏酸作为前体物质,转化过程中会产生香草酸等中间产物。
液相色谱仪厂家相关研究曾采用过薄层色谱法测定阿魏酸、香草酸和香草醛,但是此法定量欠准确,层析时板与板之间重现性较差。因此,研究了能同时测定发酵或生物转化液中阿魏酸、香草酸和香草醛的反相液相色谱法,该方法的重现性好,准确、可靠,可方便地检测发酵进程。
实验仪器:液相色谱仪;微量进样器,微膜过滤器。
色谱条件:色谱柱 (250mm×4mmi.d.,5μm),流动相为:A=0.01%冰醋酸水溶液,B=甲醇;时间程序:开始时20%B,保持4min,到24min时增加至40%,到27min时增加至100%并保持2min,到30min时又降至20%,并以这种比例使柱子平衡至少5min;流速为1mL/min。检测波长:280nm检测;进样量:25μL;柱温:室温。
测定方法
1精密称取阿魏酸、香草酸、香草醛标样各0.5g,用甲醇定容至50mL,得到10g/L的标准贮备液,再由贮备液配制一系列不同浓度的3种标样的混合溶液,用液相色谱仪进行测定,得出结果绘制标准曲线。
2将发酵液或生物转化液先用滤纸过滤,再加入适量的无水乙醇,离心以除去蛋白质等大分子杂质,在除去杂质的样品中加入20%的甲醇后,再将其pH值调至5,用0.22μm微滤膜过滤得滤液。
3任意选取3个样品,按上述实验方法处理后进样测定。