1.制板:称取硅胶GF5g,加入0.4%聚乙烯醇2mL,在小烧杯中搅拌至变成黏稠状时,开始铺板,一般可制20cmX8cm的玻璃4~5块。制好的薄层板在室温下晾干,用前在110C烘箱中活化30min。

 

　　2.点样:取两块薄层板,在第一块板上准备点含有IAA、ABA和GA的甲醇溶解液,第二块板点含有CTK的乙醇溶解液。其操作方法:用微量注射器吸取100μL样液,分3-4次点在距薄板边缘1cm的位置上,样点直径要求不超过3mm,各点之间的距离1-1.5cm。点完待测样后，再分别点上IAA、GA3和ABA三个标准样。第二块板的操作相同,只是标准样用CTK。

 

　　3.展层:将点样后的薄层板架放在盛有展开剂的层析缸中,先不与展开剂接触,加盖后饱和1h,再将薄层板的点样端浸人展开剂中3~4mm,当展开剂前沿距顶端1cm左右时,停止展层。

 

　　4.定位检测:展层完毕后,微风吹干,并在紫外灯下观察色斑，根据标准样点的位置来确定未知样点中各内源激素的位置,并用铅笔圈出范围进行定位。注意应尽量缩短在紫外灯下观察的时间,避免样品分解。

 

　　5.洗脱:将含有激素色斑的硅胶分别刮下,用95%乙醇浸提(洗脱)3次,每次1h,合并浸提液,N2吹干或减压蒸干后,用pH5.4的柠檬酸-磷酸缓冲液溶解、定容,供进一步定量检测之用。

 

　　6.定量:用pH5.4的柠檬酸-磷酸缓冲液溶解、定容后可采用气相色谱、酶联免疫吸附检测或其他方法进行定量分析。