凝胶渗透色谱基于分子尺寸差异进行分离。色谱柱中填充多孔性凝胶颗粒，这些颗粒具有特定孔径范围。当样品溶液流经色谱柱时，较大尺寸的分子无法进入凝胶孔隙，只能沿着凝胶颗粒间的空隙快速通过色谱柱，在柱中停留时间较短；而较小尺寸的分子能够进入凝胶孔隙内部，其流动路径变长，在柱中停留时间相对较长，从而实现不同大小分子的分离。
 

　　常用的凝胶有交联聚苯乙烯凝胶等。以交联聚苯乙烯凝胶为例，其具有良好的化学稳定性，能在多种有机溶剂中使用，并且具有合适的孔径分布，可实现对不同分子量范围聚合物的有效分离。凝胶的孔径大小决定了可进入凝胶内部的分子尺寸上限，通过选择合适孔径的凝胶，能够针对性地分离特定分子量范围的样品。
 

　　凝胶渗透色谱仪操作步骤：
 

　　1.样品准备：将待分析的样品溶解在合适的溶剂中，制备成一定浓度的溶液。溶剂的选择需考虑样品的溶解性以及与凝胶色谱柱的兼容性，常用的溶剂有四氢呋喃、氯仿等。样品溶液需经过过滤或离心等预处理步骤，以去除其中的杂质和颗粒物，防止堵塞色谱柱。
 

　　2.色谱条件设置：根据样品的性质和分析要求，设置合适的流动相流速、柱温等色谱条件。一般来说，较低的流速有利于提高分离效果，但会延长分析时间；较高的柱温可加快分子在凝胶中的扩散速率，缩短分析时间，但可能会影响某些样品的稳定性和检测结果的准确性。
 

　　3.进样分析：使用进样器将处理好的样品溶液注入色谱柱中，启动输液泵，使流动相携带样品在色谱柱中进行分离。在分离过程中，检测器实时监测并记录样品的浓度变化，得到色谱图。
 

　　4.数据处理：对得到的色谱图进行分析处理，通过积分峰面积、测定保留时间等数据，结合已知标准样品的数据或相关计算公式，可确定样品的分子量分布、分子量平均值等信息。例如，根据色谱图中不同峰对应的保留时间和已知标准曲线，可计算出各组分的分子量，进而得到样品的数均分子量、重均分子量等参数。