手性色谱柱是由固定在硅胶或其他具有光学活性的聚合物上的单体制成的手性固定相。通过引入手性环境，反映异构体的物理特在映射异构体上，从而达到光学异构体分离的目的。为了实现手性识别，手性化合物分子和手性固定相之间至少有三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级、π-π、静电、疏水或空间。手性分离是多种相互作用的结果。这些相互作用通过影响嵌入式复合物的形成、特殊位点和分析对象的结合来改变手性分离的结果。由于这种力较弱，需要仔细调整和优化流动相和温度，以达到较好的分离效果。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，手性色谱柱的分类体系有：
1、通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
2、既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中*型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
3、基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
4、基于形成非对映体的金属络合物，也称为手性配位交换色谱(CLEC)。
5、蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定*优柱温。
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