程序降温仪通过精确控制降温速率，避免生物样本在冷冻过程中因冰晶损伤或渗透压变化而失活。以下是其实现冷冻保存的具体步骤及关键技术要点：
一、程序降温仪冷冻保存的核心原理：
低温保护剂预处理：
使用渗透性保护剂和非渗透性保护剂,减少冰晶形成并稳定细胞内渗透压。
可控降温速率：
通过降温仪设定多阶段降温程序,避免快速冷却导致胞内冰晶损伤或慢速冷却引起溶液效应.
低温储存：
最终将样本转移至液氮或超低温冰箱长期保存。
二、程序降温仪具体操作步骤：
1. 样本准备与加载
平衡渗透压：
将生物样本与冷冻保护剂逐步混合，室温下缓慢平衡,避免渗透休克。
分装与标记：
将样本分装至无菌冻存管或麦管（避免过多液体导致降温不均），标记名称、浓度、日期等信息。
2. 程序降温仪设置
选择预设程序：
根据样本类型选择标准程序,或自定义多阶段降温参数.
传感器校准：
确保冻存管与降温仪探头直接接触（如插入专用样品架），实时监控温度变化。
3. 降温执行与监控
启动程序：
将装载样本的冻存管放入降温仪样品槽，启动程序后自动按设定速率降温。
关键参数记录：
实时记录温度曲线、降温速率及样本状态（部分高*设备配备可视化摄像头）。
避免温差突变：
确保冻存管与降温仪接触紧密，避免因空气间隙导致局部过冷或升温。
4. 超低温储存
液氮冷冻：
降温至-40℃以下后，迅速将样本浸入液氮（或液氮蒸汽相），避免冰晶再生长。
长期存储：
将样本转移至液氮罐或-80℃冰箱，定期补充液氮并监控温度稳定性。
5. 复苏验证
快速解冻：
从液氮中取出样本后，立即置于37~40℃水浴中快速摇晃解冻（防止冰晶形成）。
活性检测：
通过台盼蓝染色、流式细胞术或培养法验证细胞存活率。
