将水中有机碳氧化成二氧化碳 (CO2) 和测量所产生的CO2。TOC可用于对未正确清洁的仪器中的杂质和残留物进行定量，以及测量所有含碳化合物：药物活性成分 (Active Pharmaceutical Ingredients， API)、清洁制剂、蛋白质和中间产物。用来测量TOC的分析技术有着相同的目标：把有机分子*氧化成CO2，测量所生成的CO2，并以碳浓度表示。所有方法都必须区分无机碳和有机碳，无机碳可能来自水中溶解的CO2和重碳酸盐，而有机碳则是由样品中有机分子氧化而成的。总碳 (TC) 是有机碳与无机碳之和，因此测得的总碳 (TC) 减去测得的无机碳 (IC) 的值就是TOC：TOC = TC - IC.1

各种TOC分析仪器的不同之处在于氧化水样品中有机物的方法，以及检测样品中所生成CO2浓度的方法。不同的检测方法对样品分析的准确度有很大影响，进而影响清洁验证测试程序。

TOC氧化技术

市面上所有TOC分析仪器都使用以下两种方法之一来氧化有机化合物并将之转换为CO2气体：燃烧，或紫外 (UV) 灯过硫酸盐 (法)。

燃烧技术使用氮气、氧气或空气流，温度在600°C以上。燃烧方法在氧化步骤中也使用催化剂。该类方法中常用的催化剂有氧化铜、氧化钻或铂。

UV过硫酸盐氧化方法利用UV光使有机物*氧化为CO2。将样品暴露在设备内汞蒸汽灯的UV光之下，将样品内的有机物转化为CO2气体。对于浓度大于1ppm的样品或化合物 ，则在样品流中加入过硫酸盐并混合均匀，从而利用接受照射的样品生成的负价氢氧 (HO-) 基来确保氧化过程顺利进行。过硫酸盐是一种强氧化剂，在UV辐射下生成硫酸盐和氢氧基，可将有机化合物*氧化为CO2。 

TOC检测方法

为检测CO2浓度，分析仪器需要使用检测方法以区分样品中的CO2和其他分子。现有两种检测方法：非分光红外 (Non-Dispersive Infrared， NDIR) 或电导测量。

用于气体测量的NDIR技术依靠各种气体在红外光谱范围内的能量吸收特征来判别分子类型。运用NDIR技术的 TOC分析仪器使红外线穿过两根*相同的导管射入检测器。第一个导管作为参比池，充满无红外吸收的气体，如氮气。第二个导管 (池) 用于气体样品的测量。

电导检测方法使用电导传感器，通过计算电导率确定 CO2的浓度。为计算TOC，水溶液通过两个电导传感器，其中一个测量总碳 (TC) 浓度而另一个测量无机碳 (IC) 浓度。根据测量结果，计算出样品的TOC浓度。

NDIR方法可对含碳范围在0.004 – 50,000 ppm 的样品进行定量，而电导率法可以进行十亿分之一 (part per billion, ppb) 级的定量。总体而言，NDIR和电导率检测器对于低浓度的TOC有足够的灵敏度，但会受到离子干扰。使用只允许CO2选择性透过的半透膜可减轻此因素的影响。

Sievers* TOC技术与众不同的特点

结合使用UV过硫酸盐氧化与*的选择性CO2膜技术, 是Sievers系列TOC分析仪优于常规TOC技术(如燃烧 NDIR技术)的众多要素之一。Sievers技术能持续为用户提供更为精确的TOC读数。

在Sievers的基于膜的电导方法中，CO2传送模块中的选择性CO2膜可阻止离子进入，在使CO2无阻通过的同时，排除了干扰化合物和氧化副产物。选择性CO2膜消除了背景干扰，并防止非碳基化合物和副产物聚集。

清洁验证带来了一种充满挑战的局面，因为各种样品的TOC浓度有时是未知的，因此的分析条件很难达到。以下几点之处确保了UV过硫酸盐膜电导技术*的分析结果。

试剂自适应功能保证*氧化

为使清洁验证样品*氧化，Sievers 900 系列的分析器具有试剂自适应功能，可优化酸和过硫酸盐氧化剂的流量。

非催化燃烧方法

非催化燃烧方法消除了向燃烧反应器中添加催化剂的定量（根据样品中碳浓度而定）时的人为误差。燃烧氧化方法会产生毒性气体。如清洁验证样品中含氯化物，燃烧可能生成对人体有潜在危害的气体，某些TOC分析仪不吸收这类气体。

无需NDIR检测器

NDIR检测器需要一定的时间来预热 （30到45分钟），因此造成更多的停工时间和样品积压。NDIR技术需要经常进行校正（每小时或每天），由清洁验证样品的碳浓度决定。这类检测器经常出现校正漂移现象。校正时间占NDIR仪器运行时间的6%到10%。

不用载气

NDIR检测器的载气价格不菲，并且泄漏和不稳定的校正通常引起高TOC背景。载气污染也可能造成测量困难和引起碳的高背景。

出色的灵敏度和高回收率

Sievers TOC分析仪的电导池由高纯度石英制成，提供更佳的稳定性和0.03ppb级别的检测。图1和表1从灵敏度和TOC回收率两个方面，就牛血清蛋白 (Bovine Serum Albumin, BSA) 对Sievers TOC与传统燃烧-NDIR TOC技术进行比较。

表 1. Bovine Serum Albumin (BSA) TOC 回收百分比对比研究**

**该对比研究使用*矫正后的仪器。分析之前，先进行并通过系统适应性测试。对两种仪器，制备并使用同一BSA储各溶液。研究在可控的环境中进行；分析期间，仪器未出现偏差。

为什么说现在正是改用Sievers TOC进行清洁验证的时候

HPLC分析很漫长，增加了实验室清洁验证分析所需时间。使用HPLC将导致数小时或数天的停工，造成高额成本并减少了提供给患者的产品数量。有例子表明，某些制药企业单日停工损失超过100万美元。表2将Sievers 900 TOC分析仪与燃烧/催化NDIR和燃烧NDIR进行了详细比较，其中包括估算的月运行成本。

TOC是一种用于低浓度级别有机化合物检测的、简单快速的分析方法，并且可以用于无法使用HPLC检测的污染物。与常规方法相比，TOC已被证明可减少75%以上停工时间和方法验证时间。FDA近出台了新的指导方针——21世纪现行药物生产质量管理规范 (cGMP's for the 21st Century)，旨在加强和更新药物制造规则，使用TOC分析进行清洁验证，与特异性分析方法相比 (如HPLC) 在质量和效率上的优势已引发越来越多的关注。2

参考文献

1. USP<643>TotalOrganicCarbon.

2. Andrew W.Walsh为本应用摘要提供了内容。