人腺苷激酶的高通量测定

PRECICE ^® ADK 检测试剂盒 提供了一种方便、高通量兼容且非放射性的检测方法，用于 ADK 活性的体外测量和新型 ADK 抑制剂的药物发现。该试剂盒是药物发现的新工具，可通过 HTS 搜索新型 ADK 抑制剂。

原理：
腺苷激酶使用ATP作为磷酸供体。它将 ATP 的末端磷酸基转移到底物上，产生副产物 ADP。该测定基于使用肌苷作为替代 ADK 底物和涉及高活性 IMPDH（肌苷单磷酸脱氢酶）的偶联反应，用于直接测量 ADK 形成的肌苷单磷酸 (IMP)。在肌苷和 ATP 存在下，ADK 催化肌苷磷酸化形成 IMP 和 ADP。然后，在 NAD 存在下，IMP 立即被高活性 IMPDH 氧化为 XMP，从而形成 NADH ₂。

主要特征：

方便的

•非放射性
•均质
• 340nm 处连续吸光度监测

定量

• IMP 立即以定量方式转化为 NADH2，以便进行准确的动力学分析

高通量格式

•该测定在标准多孔微孔板中进行
•使用配有 340 nm 滤光片的通用读板器
•满足 HTS 测定的要求（Z' 因子 0.68）

可靠的

•使用已知的 ADK 抑制剂 A-134974 和已知可被腺苷激酶磷酸化的核苷类似物利巴韦林进行验证

ADK在人体中的作用

腺苷激酶是一种普遍存在的酶，调节细胞内和细胞外的腺苷 (AR) 浓度，是中枢神经系统功能的重要调节剂，也是参与缺氧、炎症和伤害感受的信号分子。腺苷激酶与腺苷脱氨酶一起调节细胞内和细胞外的腺苷浓度。抑制腺苷激酶会导致局部腺苷浓度选择性增加，并降低体内癫痫发作易感性和伤害感受⁽³⁾。 ADK 功能障碍与多种病理有关，包括糖尿病⁽¹³⁾、癫痫⁽⁶⁾和癌症。因此，ADK成为一个合理的治疗靶点，腺苷调节药物已被广泛应用。经过测试⁽¹⁾作为新的镇痛和抗炎药物⁽⁴⁾用于治疗精神分裂症⁽⁷⁾或限制缺血性中风后的脑损伤⁽⁸⁾。

验证

使用PRECICE® ADK 筛选测定试剂盒筛选 ADK 抑制剂和 IC50 测量，已使用化合物 A-134974（一种已知的 ADK 抑制剂）（Sigma-Aldrich，获得 Abbott Laboratories 许可）进行了验证。 Z'-因子根据 44 个阴性（无 ADK 抑制）和阳性（500nM A-134974 抑制 ADK）计算得出，测量结果为 0.68，对于筛选测定而言，这是一个出色的性能水平

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