Bst DNA 聚合酶(大片段)
用于 DNA 测序高 GC 区域以及纳克量 DNA 模板的快速测序。
描述:
Bst DNA 聚合酶,大片段是嗜热脂肪芽孢杆菌 DNA 聚合酶蛋白的一部分,包含 5´ → 3´ 聚合酶活性,但缺乏 5´ →3´ 核酸外切酶活性。
酶提供强大的链置换活性。最佳温度为 60-65 ⁰C。Bst 在 80 ⁰C 时热失活。Bst 聚合酶大片段由含有嗜热脂肪芽孢杆菌 DNA 聚合酶基因的大肠杆菌菌株制备,缺乏 5´ → 3´ 核酸外切酶结构域。
Bst DNA 聚合酶大片段提供三种浓度:8,000 U/ml、50,000 U/ml 和 400U/ml,保存缓冲液为 10 mM Tris-HCl,pH 7.5、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA 、0.1% Triton X-100 和 50% 甘油。高浓度 (400U/ml) 还提供无甘油缓冲液和冻干粉末。
图:MCLAB Bst DNA 聚合酶(大片段)显示出比其他两个供应商的产品更高的链置换聚合酶活性。
应用:
- 核酸扩增方法,包括等温扩增、LAMP
- 全基因组扩增 -
通过有问题的二级结构进行测序
使用 Bst DNA 聚合酶的典型 LAMP 方案
成分 | 最终浓度 | 25 µl 反应 |
Bst 的 10X 缓冲器 | 1X(不含MgSO4) | 2.5 微升 |
硫酸镁 (100 mM) | 总计 8 mM | 2.0 微升 |
dNTP 混合物 (10 mM) | 每个 1.4 mM | 3.5 微升 |
FIP/BIP 底漆 (10X) | 1.6微米 | 1微升 |
F3/B3 底漆 (10X) | 0.2微米 | 1微升 |
LoopF/B 引物 (10X) | 0.8微米 | 1微升 |
Bst 大片段 (8,000 U/ml) | 80-320 U/毫升 | 0.95-1.1 微升 |
DNA样本 | > 10份或以上 | 不适用 |
无核酸酶水 | 最多 25 µl | |
总反应体积 | 25微升 |
比活度: 120,000 U/mg
提供于:
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1.0 mM DTT
0.1 mM EDTA
0.1% Triton X-100
50% 甘油
pH 7.5 @ 25°C
提供于:
10X PCR 缓冲液 II
10x PCR 缓冲液 II :
200 mM Tris-HCl
100 mM 硫酸铵
100 mM KCl
20 mM MgSO 4
1.0% Triton X-100
pH 8.8 @ 25°C
单位定义:
1 单位定义为将 10 nmol dNTP 转化为酸所需的聚合酶量65°C 30 分钟内不溶物质。
推荐储存条件: -20°C
注意:
- 建议长期储存:0.1% Triton X-100
- 不建议反应温度高于 70°C。
- Bst DNA 聚合酶不能用于热循环测序。
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