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HitHunter® cAMP 检测试剂盒手册简介

阅读：862 发布时间：2023-06-30

HitHunter cAMP 检测小分子试剂盒提供了一种稳健、高灵敏度且易于使用的检测方法，用于根据细胞中 3'-5'-环单磷酸腺苷 (cAMP) 的产生来监测 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 的激活。该试剂盒非常适合筛选和分析小分子。对于测试生物制剂样品（例如血清或血浆中的粗制生物样品、纯化或未纯化的抗体[抗配体或抗受体]以及杂交瘤上清液），我们建议使用专为生物制剂设计的 HitHunter cAMP Assay for Biologics和大分子应用。其他来源的细胞系也与 HitHunter cAMP 检测兼容。

技术原理

配体结合后的GPCR激活启动了一系列的第二信使级联，从而导致细胞反应。该信号传导涉及一种被称为腺苷酸环化酶的膜结合酶。Gαs -和Gαi -偶联受体分别通过抑制或刺激腺苷酸环化酶来调节cAMP。在HitHunter cAMP实验中，过表达GPCRs的细胞利用GPCR的自然偶联状态来监测Gα的激活s -和Gαi -耦合受体。在配体刺激后，通过使用基于酶片段互补（EFC）技术的同质（无洗涤）、信号获得竞争性免疫分析法测量细胞cAMP水平来监测GPCR的功能状态。

GPCR cAMP路径

在该实验中，来自细胞的cAMP和ED标记的cAMP（ED-cAMP）竞争抗cAMP抗体（Ab）结合位点。抗体结合的ED-cAMP不能与EA互补，但未结合的ED-cAMP可以自由地补充EA形成活性酶，随后产生发光信号。所产生的信号量与细胞中cAMP的信号量

成正比。HitHunter cAMP分析EFC技术使用了一种β-半乳糖苷酶（β-gal）酶，它被分成两个片段，酶供体（ED）和酶受体（EA）。这些片段独立地没有β -gal活性；然而，在溶液中，它们迅速补充形成一个活性的β -gal酶。HitHunter的cAMP检测试剂盒提供了一种强大的、高灵敏度的、易于使用的、基于细胞的功能检测方法，通过cAMP的产生来研究GPCR的活性。该试剂盒包含了检测表达Gα的cAMPHunter™细胞中cAMP所需的所有试剂s -和Gαi由小分子配体诱导的-偶联受体。该柔性检测系统已被设计用于96孔和384孔板格式的激动剂或拮抗剂模式。

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