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54次以下是兔子白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒的实验使用说明综合整理:
BS-4207 兔子白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒
一、实验原理
采用双抗体夹心法:包被抗IL-1β抗体的微孔板捕获样本中的IL-1β,再与HRP标记的检测抗体结合形成复合物,TMB显色后通过OD值定量分析。
二、试剂盒组成
标准品:通常为冻干粉(如2700ng/L),需用稀释液复溶
酶标试剂:HRP标记的检测抗体(3ml/6ml)
洗涤缓冲液:50×浓缩液,需蒸馏水稀释
底物(TMB)和终止液各12ml
封板膜、密封袋及说明书
三、样本处理要求
血清/血浆:
避免溶血,离心条件:2000-3000rpm×10-30分钟
短期保存于2-8℃,长期需-20℃以下分装,避免反复冻融
组织匀浆:
按重量加入PBS匀浆,离心取上清
细胞上清:
离心去除碎片后分装冻存
注意事项:
避免使用含NaN3的样本(抑制HRP活性)
四、操作步骤
标准品稀释:梯度稀释至7个浓度,第8孔为空白对照
加样:
标准品/样本各加50-100μl,37℃孵育1-2小时
洗涤:
使用稀释后的洗涤液,洗板4-6次,拍干
显色:
加TMB避光反应15-30分钟,终止后15分钟内测OD450nm
五、注意事项
试剂使用前需平衡至室温,避免泡沫产生
不同批号试剂不可混用,底物需避光保存
显色后若OD值超出标准曲线范围,需稀释样本复测
六、数据计算
以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线,通过回归方程计算样本浓度。
注:以上资料仅供参考,如需具体品牌试剂盒的完整说明书,可参考对应厂商提供的文档。
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