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84次以下是植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒的实验使用说明,综合了相关检测原理、操作步骤及注意事项:
BS-8002 植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒
检测原理
采用双抗体夹心法:
微孔板预包被LOX抗体形成固相抗体
依次加入样本、HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物
TMB显色后,颜色深浅与LOX活性呈正相关,450nm测OD值计算浓度
试剂盒组成
预包被微孔板
标准品(通常含S0-S5浓度梯度)
HRP标记抗体、TMB显色液、终止液
浓缩洗涤液(需1:20稀释)
样本处理
组织样本:按1:5~10(质量:体积)加入提取液,冰浴匀浆后4℃ 15000g离心20min取上清
保存要求:分装后-20℃冻存,避免反复冻融;NaN3会抑制HRP活性,需避免使用
操作步骤
标准品稀释:按说明书梯度稀释(如0-320 U/L)
加样:
分别加入标准品、样本各50μL至对应孔
立即加入50μL HRP标记抗体,37℃孵育60min
洗涤:手工洗板需加满洗涤液,静置1min后甩干,重复5次
显色:
每孔加TMB底物100μL,37℃避光显色15-30min
加终止液50μL,颜色由蓝变黄
检测:450nm测OD值,用标准曲线计算样本浓度
注意事项
试剂使用前需室温平衡20分钟,结晶需水浴溶解
显色时间需严格控制,避免过度反应
空白孔(S0)作为阴性对照,样本OD值需在标准曲线范围内
结果计算
样本浓度=标准曲线对应浓度×稀释倍数(若样本预先稀释需乘以相应系数)
如需具体试剂盒的差异步骤,请参考对应产品的说明书。
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