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购买到原代细胞之后应该注意什么事项
阅读：3608 发布时间：2021/4/25
原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。对原代细胞最直观的理解，就是不能无限传代下去，不论你是自己提取的细胞还是从试剂公司购买的细胞，都会建议你在P2-P3代完成实验是*。所以，掌握提取和培养原代细胞的技巧，尽可能地让细胞的好状态多维持几代，对实验成败来说至关重要。那么对已经购买的细胞之后应该注意什么注意事项呢
1. 收到细胞时，要镜下观察是否有污染情况；收到细胞的前几天，要做好各种倍数的镜下拍照记录，以防细胞出现问题后，可以跟公司很好地沟通。
2. 收到细胞后，不要马上处理。应置于培养箱中静置4h以上再操作。如果不着急，可静置过夜。
3. 细胞的第一次传代，一定要密度高一些传代，原代细胞传代密度低，很难长起来。建议1:2-1:3传代。
4. 原代细胞传代时(内皮细胞，贴壁为例)，0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培养箱内消化30sec，再加入5ml培养基(正常消化贴壁细胞，我们使用胰酶和培养基的量是1:1，但是原代细胞必须用大量培养基中和胰酶)。
5. 原代细胞不建议冻存，因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话，建议在P2或P3代冻存，冻存液中的血清越多越好，建议比例9(血清):1(DMSO)。
6. 原代细胞复苏时，置于37-38度水浴融化细胞，并加入10ml培养液(正常贴壁细胞复苏时，也可以使用这种比例，复苏成活率会大大提高)，离心重悬铺板。