F- λ- fhuA2[lon] ompT lacZ::T7gene1 gal sulA11Δ(mcrC-mrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]
High5TM系列 ER2566感受态细胞为lon 和 ompT蛋白酶缺陷菌株。
膜外蛋白酶OMPT的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。
High5TM系列 ER2566感受态细胞采用特殊化学试剂制作,可用于DNA的化学转化,经pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg。
1. 取100μl冰上融化的ER2566感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
1. 感受态细胞在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
精品啪啪一级免费视频 上海淳麦生物科技有限公司 感受态细胞培养专家 4006815880
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