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重组人BMP2的制备方法通常包括以下步骤
2025-3-12 阅读(175)
重组人BMP2的制备方法通常包括以下步骤：
1.基因工程手段：首先，将编码BMP-2的基因插入到表达载体中，然后将其转入宿主细胞，如大肠杆菌，使宿主细胞能够表达BMP-2。
2.蛋白表达：在适宜的培养条件下，使转入基因的细胞进行发酵，大规模生产BMP-2蛋白。
3.细胞破碎与包涵体提取：通过高压匀浆等方法破坏细胞壁，收集并漂洗包含BMP-2的包涵体。
4.变性与复性：使用尿素等变性剂使蛋白复性，通过控制pH值和尿素浓度，以及应用超滤膜技术，使变性的BMP-2蛋白重新折叠恢复活性。
5.纯化：采用离子交换层析、亲和层析等方法，去除杂质，获得高纯度的rhBMP-2。
6.冷冻干燥：最后将纯化后的蛋白进行冷冻干燥，制成最终的成品。
重组人BMP2的存放要求对于保持其活性和稳定性至关重要。以下是具体存放要求：
一、温度控制
冷冻保存：应存放在冷冻环境中，一般推荐的温度为-20℃至-80℃。这样的低温环境可以有效地减缓蛋白质的降解速率，保持其活性。
避免反复冻融：为了保持BMP-2的活性，应避免对其进行反复冻融。反复冻融会导致蛋白质结构发生变化，从而影响其生物活性。
二、容器与包装
无菌容器：BMP-2应存放在无菌容器中，以避免细菌污染。无菌容器可以是玻璃瓶或塑料瓶，但必须经过严格的灭菌处理。
密封包装：容器中的BMP-2应密封包装，以防止外界空气和水分对其产生影响。
三、其他注意事项
避光保存：虽然直接光照对BMP-2的影响可能不是主要因素，但为了避免潜在的风险，建议将其存放在避光的地方。
远离有害物质：BMP-2应远离有害物质，如强酸、强碱、有机溶剂等，这些物质可能会与其发生反应，导致蛋白质变性或失活。
标注与记录：在存放BMP-2的容器上应清晰标注其名称、浓度、生产日期、有效期等信息，以便于管理和使用。同时，应建立相应的库存记录，跟踪其使用情况。
