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大肠杆菌专用破菌液在大肠杆菌菌种和蛋白表达高通量筛选中的应用
2024-4-2 阅读(409)
大肠杆菌表达系统是使用很广泛的蛋白质表达系统，拥有遗传背景清楚、表达水平高、操作简单、培养周期短等优点，市售的大约30%的重组蛋白产品都是由大肠杆菌系统生产而来。
应用大肠杆菌表达系统时，为了得到符合科研和产业需求的重组蛋白目标产物，往往需要进行目标蛋白基因或菌种的突变，进行大量且繁琐的表达菌种和高表达蛋白突变体的筛选工作。大肠杆菌作为宿主菌，表达的蛋白定位为胞内、胞外和周质腔三种。为获得胞内蛋白或周质腔蛋白，往往需要对大肠杆菌进行破碎。虽然胞外蛋白可以借助信号肽的引导分泌到胞外，但蛋白的分泌效率通常不高，且很多时候，发酵中后期目标蛋白才开始运输到胞外，导致绝大多数蛋白仍储存在胞内，所以在进行蛋白制备时，为提高蛋白收率，仍需要进行细胞破碎。因此，破碎细胞是高通量筛选大肠杆菌菌种时必需的环节。
目前常用的破碎细胞的方法有超声、均质机压力、溶菌酶、反复冷冻、化学试剂等，但是这些方法不同程度存在破碎效率低、成本高、周期长、细胞破碎不均一等的缺点。赛尔瑞成开发的大肠杆菌专用破菌液，能够高效、简便的对大肠杆菌进行细胞破碎，特别适用于需要细胞破碎的高通量筛选。
★ 产品优势
1. 原位破菌，使用便捷，筛选成本更低
原位收集菌体，原位破菌，高通量操作。适用于各种型号培养板（如96孔板、48孔板、6孔板等），节省仪器成本、人力成本，节约时间，方便操作。
2. 组成成分温和
不含还原剂、强变性剂、离子型去污剂等烈性成分，对绝大多数蛋白结构和活性无影响。
★ 使用方法
1. 按常规方法，在培养板（如96孔板、48孔板、24孔板等）中接种培养大肠杆菌，至蛋白表达完成，即可使用孔板离心机离心收菌，弃去上清，尽量去除干净；
2. 只需将孔板中收集的菌体按照孔板体积的五分之一左右加入破菌液，简单混匀，置于-20°C以下冰箱，待冷冻结实。需要破菌时取出室温自然解冻充分，然后按常规方法高速冷冻离心，收取破菌上清和菌体沉淀。
