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真核表达细胞与原核表达的区别有哪些
2021-10-11 阅读(10841)
真核表达细胞和原核变达的区别：
真核表达：常用酵母、昆虫、动物和哺乳动物细胞。其优点是根据原核生物蛋白与靶DNA的高度特异性相互作用而设计，不存在基因的非特异性激活或抑制。它可以诱导高达105倍的高效基因表达。可以严格控制基因表达。
原核表达：它的优点是可以在短时间内获得基因表达产物，而且成本相对较低。方法也简单，可以表达的蛋白质也很多。但缺点是表达的蛋白质没有经过修饰，不一定具有天然活性，表达系统不能调节表达时间和表达水平。一些基因的持续表达会对宿主细胞产生毒性作用，过度表达可能导致非生理反应。目前，蛋白质往往以包涵体的形式表达，这也导致了产品纯化的困难。可用于抗体制备或检测，但应避免功能试验。
真核表达细胞载体趋向于既有利于扩增目的基因又有利于筛选阳性克隆的载体的构建。许多有效的应用范围广的强启动子和增强子被人发现并应用于载体中，大大提高了目的基因的表达量，另外一些强的组成型启动子，如SV40早期启动子+PHTLv，已应用于大规模生产的细胞系中。
应用以GS为筛选标志的表达载体可兼有筛选和扩增目的基因两种功能，是目前研究的重点。以IRES连接的双顺反子表达载体已成为核表达载体的主体。在同一启动子操纵下，筛选基因或报告基因与目的基因转录在同一mRNA上通过IRES的作用，表达出两种蛋白，因而在理论上可认为，通过了筛选或表达了报告基因的克隆必为阳性克隆，即表达目的基因的克隆，有报道说这种双顺反子的共表达率为90％。这就大大提高了筛选率，简化了实验过程。
将强启动子、增强子和可扩增的筛选标志组装在同一载体上，构建高效表达和筛选的表达载体并将其运用于最合适的表达系统中，是当今真核表达载体构建研究发展方向。
