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使用无血清细胞冻存液冻存杂交瘤细胞的优势
2019-11-28 阅读(716)
在单克隆抗体的制备过程中，及时冻存原始孔的杂交瘤细胞以及克隆化得到的亚克隆细胞是十分重要的。因为在没有建立一个稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能发生细胞的污染、细胞突变、分泌抗体能力的丧失等等。如果没有原始细胞的冻存，则可能因上述意外而前功尽弃。 因此，杂交瘤细胞的冻存在单克隆抗体制备过程中起着关键性作用。
目前，杂交瘤细胞的冻存方法同其他细胞系的冻存方法是一样的。
传统杂交瘤细胞的冻存：
传统细胞冻存液的组分：培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，或90%的血清+10% DMSO
传统杂交瘤细胞冻存方法：
1. 初筛、复筛验证阳性的每个单克隆细胞转种3个48孔板的培养孔，培养至汇合度达90%；
2. 吸去培养基，加入传统细胞冻存液（需现用现配）重悬细胞，调整浓度至1x106/ml，然后将这3个48孔板的培养孔细胞冻存悬液合并至一支细胞冻存管中；
3. 程序降温方法冻存，先将冻存管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），后才移至液氮罐中进行长期的储存。
（其中需要注意的是-20℃条件下不可超过1个小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量的死亡。）
传统杂交瘤细胞冻存面临的困难：
1. 需现配冻存液，步骤繁琐；
2. 因不能孔板原位冻存，且不能微量冻存，所以需将3孔细胞合并一管冻存管冻存，步骤繁琐；
3. 需要程序降温（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步骤繁琐；
4. 含血清，细胞污染(病毒、霉菌和支原体等)的风险更高；
5. 血清批次、品质间差异导致冻存液的批次间差异；
6. 只能液氮冻存，不能-80℃冰箱冻存。
Cellregen无血清细胞冻存液，是一款可用于杂交瘤细胞冻存的冻存液，成分明确，含DMSO、糖类、氨基酸等成分，不含血清和动物源成分的通用型冻存液。
可取4mL无血清细胞冻存液试用装
申领活动日期：2019.11.18-2019.12.31
Cellregen无血清细胞冻存液冻存杂交瘤细胞的方法：
1. 验证阳性克隆的细胞培养孔，将培养基上清小心吸取干净；
2. 加入适量Cellregen无血清细胞冻存液，充分浸润细胞（无需消化细胞）；
3. 盖上盖板，直接放入-80℃冰箱，长期冷冻保存。
可见，Cellregen无血清细胞冻存液冻存杂交瘤细胞的优势：简单、方便、快捷
1. 即用型，无需现配，可直接使用
2. 可孔板原位冻存，可微量冻存，无需使用冻存管
3. 无需程序降温，可直接放置-80℃冻存，操作简单
4. 不含血清，大大减少细胞污染
5. 因不含血清，批次间差异小
6. 无需液氮，-80℃冰箱长期冻存
