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Simoa®检测循环系统中肺癌来源EV的数量
2025-4-17 阅读(82)
背景
PD-L1蛋白在肿瘤细胞或肿瘤微环境（TME）中的高表达已被确定为预测免疫治疗疗效的生物标志物，并被FDA批准为各种实体瘤开始治疗的指标。然而，没有证据表明循环PD-L1表达是否与组织PD-L1表达一致，以及循环PD-L1水平是否能预测组织PD-L1表达。由于分离过程复杂，临床样本中EV外泌体生物标志物的鉴定和定量仍然具有挑战性。通过流式细胞术技术评估外泌体需要在检测前分离外泌体，这在临床环境中是不可行的。相比之下，Simoa®平台可能提供一种超灵敏、无创、全自动和高通量EV检测，具有双EV生物标志物靶向特征。我们开发了基于Simoa®技术的PD-L1 + EV检测测定法，并确定了T-EVs 与肿瘤组织之间PD-L1 表达的显着相关性。
方法
含有EV的样品与包被有捕获Epcam抗体的磁珠一起孵育。将磁珠-EV复合物与生物素化的PD-L1检测抗体和SBG依次孵育，然后加载到Simoa光盘上。SBG与 RGP的催化反应在微孔中受到限制。如果将磁珠-EV-检测抗体-SBG复合物加载到孔中，该仪器会检测到荧光信号增加。
图1. 用于检测EV的Simoa免疫测定法的原型
结果
TPS临界值比较了表达PD-L1的患者和不表达PD-L1的患者之间的Epcam-PD-L1 水平，当TPS截止值设置为10%时，观察到最高的AUC。在此临界值下，阳性样品中的Epcam-PD-L1 EV水平显著升高。此外，Epcam-PD-L1 EV水平与每位患者的TPS 乘以肿瘤体积的相关性较高。
图2. Epcam-PD-L1 EV信号在PD-L1高表达样本中(TPS>10%）浓度较高(左图)；Epcam-PD-L1 EV信号与TPS*Vol之间呈现较强相关性（右图）
结论
根据我们的结果，Simoa®原型检测特定来源的细胞外囊泡，可能提供一种无创和动态的方法来监测接受免疫治疗的患者的肿瘤PD-L1表达。
