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介绍两种不同的支原体检测试剂盒
2021-10-27 阅读(636)
在细胞培养，特别是传代细胞培养中，支原体污染率达到15-35%。支原体的侵染会引起细胞功能和基因表达的严重改变，并造成持续危害。由于支原体污染会严重影响实验结果的可靠性、重复性和一致性，对支原体的常规检测非常重要。
传统的支原体检测方法很耗费时间，通常需要一天至数周，而且操作比较繁琐，度不高。
中国药典给定的支原体标准检测方法有两种：培养法和DNA染色法。培养法方法简单，假阳性率低，但样品需要量高，耗时20天左右，时间漫长。DNA染色法结果直观，假阳性率低，但需要荧光显微设备，实验操作复杂。
能否找到一种省时、省力且性高的方法检测支原体污染呢？
目前，市场上具有多款支原体快速检测试剂盒，我们选取了其中两种常见的品牌，就其检测原理与操作进行一下比较。
一、美国CLARKBioscience品牌一步法检测试剂盒
美国CLARKBioscience公司研发的一步法支原体检测试剂盒One-stepQuickcolorMycoplasmaDetectionKit，利用等温扩增的方法，可检测7种常见支原体的基因。
该检测方法与PCR方法类似，检测过程中，只需取少量细胞培养上清，及一个能控制温度的水浴锅或恒温金属浴，其扩增产物的颜色可通过肉眼直接观察判断，整个过程需要1小时左右。
该方法对仪器的要求比较低，理论上灵敏度比较高。缺点在于检测的支原体种类太少，目前已发现的近200种支原体，只能检测其中的7种，检测范围太窄，也不符合国家药典的规定。而且肉眼观察结果比较主观，如果实验员刚好有色盲或色弱的问题，此种方法放弃。
二、美国Lonza品牌生物发光法检测试剂盒
美国Lonza品牌的MycoAlertTM和升级的MycoAlertTMPLUS支原体检测试剂盒，采用生物发光的方法，检测支原体酶活性。其检测的支原体酶广泛存在于180多种支原体中，而不存在于真核细胞中。
该方法利用支原体酶的特定活性，进行选择性的生物化学检测。当支原体被溶解后，释放的酶与支原体检测试剂盒中提供的底物发生催化反应，将ADP转化成ATP，参与生物发光反应，并可通过分光光度计测定。如果样品添加底物后读数上升，表明存在支原体污染。整个实验过程需要20分钟左右。
该方法能够检测的支原体种类比较全，检测结果量化，容易判断，耗时短。缺点是需要配置发光仪或多功能酶标仪，灵敏度也可能低于扩增法。
