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ELISA实验结果异常问题分析

阅读:112          发布时间:2025-4-28

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。在检测时,受检标本(测定其中的抗原)与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体,通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。ELISA实验结果出现异常剖析:

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一、白板异常:显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。

1. 试剂已过效期,或不同试剂盒组分混用;

解决方式:检查试剂的组分及批号,确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用。

2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B;

解决方式:严格按说明书的步骤操作,加完试剂后可观察一下液面高度是否一致,以减少漏加现象。

3. 洗板及加样过程中,酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力;

解决方式:确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净。

4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制;

解决方式:每次配制时都应看清标签标明物质。

5. 蒸馏水有问题;

解决方式:确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染,与好蒸馏水比较。

6. 显色弱、灵敏度低。

解决方式:实验结束后,包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。

二、阴阳性对照正常,但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。

1. 未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本,但质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出。

解决方式:质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的,可存于 2-8℃,如需长期保存,应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装,并置于-20℃以下保存。

2. 质控品或标本高温放置过久,或被反复冻融致待测物滴度下降,而未能检出。

解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配。

3. 仪器设定不正确,滤光片不匹配。

解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配。

三、实验结束后,阴阳性对照正常,质控正常,但标本感觉显色较弱。

1. 待测标本中可能不含强阳性标本,故结果可能是正常的。

解决方式:如有怀疑,可复检。

2. 标本加入叠氮钠作为防腐剂。

解决方式:酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂,可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂。


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