聚合酶链反应技术（Polymerase chain raction ,PCR）是一种在体外扩增特定DNA片段的方法，具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，可用很短时间使目的基因或某一片段扩增十万乃至几百万倍。

一、PCR常见类型

常规PCR：

直接PCR是指直接从样品扩增目标DNA，无需进行核酸分离纯化。

热启动PCR：

热启动PCR常用于增强PCR扩增的特异性。该方法主要利用抗体、亲合配体、适体或化学修饰物等酶修饰酶，来抑制室温下的DNA聚合酶的活性。这种修饰使得在PCR体系配制阶段引物与模板、引物与引物之前的结合能力降低，从而避免了非特异性扩增。

巢式PCR：

巢式PCR是标准PCR的一种演变，其增强了反应特异性和目标扩增子的产量。

快速PCR：

在快速PCR中，通过缩减PCR步骤所需时间来完成更快的扩增，且不会影响扩增产量和效率。快速循环条件尤其适用于具有高扩增能力的DNA聚合酶，这类聚合酶在每个结合中可引入更多的核苷酸。

高GC含量PCR：

具有高GC含量（>65%）的DNA模板由于G和C碱基间的强氢键影响，比较难以扩增。富含GC的序列同时也涉及二级结构。因此，富含GC的序列可导致DNA聚合酶沿模板扩增时“卡顿"并干扰DNA合成。

多重 PCR:

多重PCR可在同一PCR反应管中同时扩增多个不同的片段。多种PCR不仅意味着节省时间、试剂和样品，还能够同时对比多个扩增子

长片段 PCR:

长片段PCR通常是指扩增大于5kb的DNA片段。长片段PCR传统上使用 Taq DNA 聚合酶（用于快速延伸）和高保真酶（用于提高准确性）的混合物。

定量PCR:

序列的扩增程度（得率）取决于模板起始量，PCR常用于对样品中的DNA进行定量，其中，最常见的应用是 基因表达定量。

二、PCR反应基本步骤

变性：根据DNA高温变性的原理，将反应体系温度升至变性温度（高于模板熔点，约95℃），使目的DNA双链裂解成PCR模板（单链）。[95℃，30s]

退火：将反应体系温度骤降至退火温度（低于引物熔点约55℃），是PCR引物与PCR模板3’端杂交，称为退火。[55~65℃，30s]

延伸：将反应体系温度升至延伸温度（约72℃），DNA聚合酶按照碱基配对原则在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互补链，使目的DNA拷贝数增加1倍。[72℃，30~60s]