细胞冻存操作步骤：

1、预先配制冻存液：

     冻存液比例多种，根据细胞的特性进行调整冻存液的比例：

     5%—10%DMSO  +  20%—90%血清  +  0%—70%基础培养液；

2、取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗1-2次；去掉培养瓶里的残余血清；

3、加入适量胰酶（浓度一般为0.25%），使胰酶覆盖整个瓶，放入培养箱消化；

4、细胞消化0.5-2min（具体时间根据镜下形态判断），显微镜下观察细胞，细胞胞质回缩，细胞间不再连接成片，此时        加入*培养基终止消化；

5、用巴氏吸管轻轻吹打细胞，形成细胞悬液，将细胞悬液1000r/min左右条件下离心3-5min；

6、弃上清，加入适量预先配制好的冻存液，巴氏吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中的细胞最终密度为                5×106/ml～1×107/ml；

7、将细胞分装入冻存管中，每管1-1.5ml；

8、冻存管标记细胞名称，冻存时间，操作者及细胞代数信息。

     对于悬浮细胞冻存，则直接收集离心细胞，除去胰酶消化的步骤，其他步骤相同。