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辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗人IgG(H+L)二抗:亲和纯化,高灵敏度

时间:2025/6/4阅读:25
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HRPHorseradish Peroxidase,辣根过氧化物酶)是一种分子量达44000的糖蛋白,由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,通常来源于辣根植物中,是临床检验试剂中的常用酶。辣根过氧化物酶(Horseradish PeroxidaseHRP)比活性高,稳定,分子量小,纯酶容易制备,所以常用。HRP广泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋 白,糖含量18%。由于其易于提取、价格相对低廉,同时性质稳定,耐热及有机溶剂的作用,与抗原或抗体偶联后,活性很少受损失,因此是迄今为止在免疫学中应用最为广泛的一种标记用酶。HRP的催化底物包括色原底物、化学发光底物等,其中常用的色原底物有邻苯二胺(OPD)、22-吖嗪-3-乙酰苯 基噻唑磺酸-6)(ABTS)、四甲基联苯胺(TMB)和4-氨基安替比林:苯酚耦联底物对等;而化学发光底物则包括Luminol/增强剂等系统。

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艾美捷辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗人IgG(H+L)二抗

货号:109-035-003

物理状态:冻干固体

纯度:抗体通过免疫亲和层析从抗血清中纯化,使用与琼脂糖珠偶联的抗原进行纯化。

缓冲液:0.01M 磷酸钠,0.25M 氯化钠,pH 7.6

稳定剂:15 mg/ml 牛血清白蛋白(无IgG,无蛋白酶)

防腐剂:无(警告:使用叠d化钠作为防腐剂将显著抑制辣根过氧化物酶的酶活性。)

免疫原:人IgG

来源宿主:山羊

 

建议的工作浓度或稀释范围:

免疫组织化学/细胞化学:1:500 - 1:5,000

使用比色底物的ELISAWestern blot1:5,000 - 1:100,000

使用ECL底物的Western blot1:10,000 - 1:200,000

 

稀释因子以范围形式呈现,因为最佳稀释度是多种因素的函数,例如抗原密度、通透性等。实际使用的稀释度必须通过实验确定。

偶联物:辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP

辣根过氧化物酶(HRP)偶联物是通过改良的NakaneKawaoi方法制备的(《组织化学与细胞化学杂志》1974年,第22卷,第1084页)。过氧化物酶偶联物常用于免疫组织化学、Western blotELISA。可用于检测辣根过氧化物酶抗原或放大含有HRP的试剂信号的抗辣根过氧化物酶及其偶联物。对于哺乳动物细胞的免疫染色,使用抗辣根过氧化物酶的一个优势是背景较低,因为该抗体不会识别这些细胞中存在的内源性类过氧化物酶。

反应性:该山羊抗人二抗与人IgG分子有特异性反应,与其它人免疫球蛋白(包括IgMIgEIgDIgA等)的轻链有交叉反应。该二抗与血清内非免疫球蛋白无交叉反应,但可能与其它种属的免疫球蛋白有交叉反应。

储存与复溶:将冻干固体储存在2-8°C。按照产品说明书指示的体积用去离子水复溶,如果溶液不澄清,可以离心。在使用当天准备工作液。产品作为未稀释的液体在2-8°C下可稳定保存约6周。

长期储存:复溶后,分装并置于-70°C或更低温度下冷冻保存。避免反复冻融。或者,加入等体积的甘油(ACS级或更优),使最终浓度达到50%,并以液体形式在-20°C下保存。

有效期:从复溶日期起一年。如果测试结果符合预期用途,有效期可以延长。  


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