小鼠IgE ELISA试剂盒，高灵敏检测小鼠生物样本中的IgE

IgE检测试剂盒是一种高度敏感的双位点酶联免疫吸附测定（ELISA），用于检测小鼠生物样本中的IgE。如果ELISA用于超出预期用途的其他用途，用户可能需要针对该用途进行优化。

艾美捷小鼠IgE ELISA试剂盒（#E-90E）双抗体夹心ELISA原理：

在此检测中，样本中存在的IgE与吸附在聚苯乙烯微量滴定板孔表面的抗IgE抗体发生反应。经过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗IgE抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgE形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过加入显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来检测与免疫吸附剂结合的酶。结合的酶量与样本中IgE的浓度成正比；因此，450 nm处的吸光度是测试样本中IgE浓度的衡量指标。可以通过从标准曲线（由标准品构建）中插值得到测试样本中IgE的量，并根据样本稀释情况进行校正。

样本采集与处理：

所有血液成分和生物材料都应被视为潜在危险品。在处理和丢弃时应遵循普遍预防措施。

如果血液样本凝固、严重溶血、乳糜血或样本完整性受到质疑，请做好记录，并谨慎解读结果。

以下样本采集和储存条件仅供参考。样本稳定性尚未经过评估。

血清样本：通过静脉穿刺采集血液。血凝块形成后，通过离心将血清与细胞分离。立即进行检测，或分装后将样本储存于–80°C（优先）或–20°C。避免反复冻融。

血浆样本：将血液采集到含有抗凝剂的容器中，然后离心。立即进行检测，或分装后将样本储存于–80°C（优先）或–20°C。避免反复冻融。

尿液样本：使用无菌或干净的尿液收集器采集中段尿。离心去除细胞碎片。立即进行检测，或分装后将样本储存于–80°C（优先）或–20°C。避免反复冻融。

已知干扰物：浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样本稀释：

检测要求每个测试样本在使用前必须进行稀释。每次进行检测时，所有样本都应进行双份检测。推荐的稀释倍数仅供参考。稀释倍数应根据未知样本的预期浓度来确定，使稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本水平，在运行整个板之前，建议先用一两个代表性样本进行系列稀释。

血清样本：推荐起始稀释倍数为1/50。要制备1/50稀释液，将5 uL样本转移到245 uL 1X稀释液中。充分混合。

血浆样本：推荐起始稀释倍数为1/50。要制备1/50稀释液，将5 uL样本转移到245 uL 1X稀释液中。充分混合。

试剂准备：

在使用前将所有试剂恢复至室温（16°C至25°C）。

稀释液浓缩液：提供的稀释液为5X浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水稀释1/5（1份缓冲液浓缩液，4份水）。

洗涤液浓缩液：提供的洗涤液为20X浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水稀释1/20（1份缓冲液浓缩液，19份水）。如果储存温度较低，浓缩液中可能会形成晶体。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。

酶-抗体结合物：根据每个微量滴定板测试条的需要计算所需的工作结合物溶液量。对于每个用于测试的测试条，将10 uL酶-抗体结合物加入990 uL 1X稀释液中。使用前立即稀释并避光保存。均匀混合，但动作轻柔。避免起泡。

预包被的ELISA微量滴定板：按供应状态即可使用。打开铝箔袋，取出板。将不会用于检测的测试条和孔取下，放回袋中，并与干燥剂一起重新密封。

小鼠IgE校准品：根据批次特定的分析证书进行准备。

结果计算：

1. 从每个样本的测试值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。

2. 对每个标准品的双份读数取平均值，并用结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来处理数据，构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合，但它们对数据的拟合精度较低。

3. 从标准曲线上插值得到测试样本值。根据血清稀释因子进行校正，以得到原始样本中的IgE浓度。