G-Actin:F-Actin体内测定试剂盒，助力药物对G-肌动蛋白与F-肌动蛋白研究

确定细胞群体中丝状肌动蛋白（F-肌动蛋白）含量与游离球状肌动蛋白（G-肌动蛋白）含量比例可靠且准确的方法是通过西方印迹法定量分析F-肌动蛋白和G-肌动蛋白的细胞分离组分（1-4）。通常的方法是将细胞在F-肌动蛋白稳定缓冲液中匀浆，随后通过离心分离F-肌动蛋白与G-肌动蛋白库。然后通过SDS-PAGE分离各组分，并通过西方印迹法定量分析肌动蛋白。最终结果提供了确定细胞骨架中整合的F-肌动蛋白与细胞质中G-肌动蛋白比例的最准确方法。本试剂盒包含了进行该检测所需的所有试剂。

G-Actin:F-Actin体内测定试剂盒（#BK037）内容：

试剂盒包含的材料足够进行30-100次检测，具体取决于检测设置，并包括用于阳性和阴性对照的试剂。包含以下组分：

裂解液和F-肌动蛋白稳定缓冲液

ATP（货号BSA04）

蛋白酶抑制剂混合物（货号PIC02）

F-肌动蛋白增强对照溶液

F-肌动蛋白解聚对照溶液

对照G-肌动蛋白标准品（货号AKL99）

抗肌动蛋白单克隆抗体（克隆7A8.2.1）（货号AAN02-S）

SDS样品缓冲液（5倍浓缩）

DMSO

详细的操作手册和广泛的故障排除指南

G-Actin:F-Actin体内测定试剂盒用途包括：

研究药物对G-肌动蛋白与F-肌动蛋白比例的影响。

研究突变细胞系与其亲本细胞系在G-肌动蛋白与F-肌动蛋白比例变化方面的差异。

研究环境物理变化对G-肌动蛋白与F-肌动蛋白比例的影响。

所需设备：

能够达到100,000×g的温控离心机。理想情况下可接受100 µL样本体积。虽然该检测可以适应更大体积，但这可能会导致每盒试剂的检测次数减少（见第六部分：检测协议）。

适合低毫升体积的小型匀浆器或25G针头和注射器。

SDS-PAGE和西方印迹装置及试剂，抗小鼠-HRP二抗

示例结果：

瑞士3T3细胞在DMEM/10% FBS中培养至50%融合度，温度为37°C，二氧化碳浓度为5%。细胞未处理（泳道1P和1S），或用0.1 µM的肌动蛋白聚合药物jasplakinolide处理30分钟，温度为37°C，二氧化碳浓度为5%（泳道2P和2S）。细胞裂解后，处理成上清液（S）和沉淀（P）组分，并根据G-肌动蛋白/F-肌动蛋白体内检测试剂盒说明书通过西方印迹法定量分析肌动蛋白。

图1：在未处理的瑞士3T3细胞中，45%的肌动蛋白为可溶性G-肌动蛋白（1S），55%为不溶性F-肌动蛋白（1P）。这与已发表的数据一致（3）。图2：在用肌动蛋白聚合药物jasplakinolide处理的瑞士3T3细胞中，仅有5%的肌动蛋白保留在可溶性G-肌动蛋白组分（2S）中，而95%存在于不溶性F-肌动蛋白沉淀组分（2P）中。泳道50、20和10分别代表50 ng、20 ng和10 ng的G-肌动蛋白标准品。M代表分子量标记（标记的分子量显示在印迹右侧）。

G-Actin:F-Actin体内测定试剂盒文献参考：

Milligan R.A. et al. 1990. Molecular structure of F-actin and location of surface binding sites. Nature 348, 217-221.

Dos Remedios C.G. et al. 2003. Actin binding proteins: regulation of cytoskeletal microfilaments. Physiol. Rev. 83, 433-473.

Phillips D.R. et al. 1980. Identification of membrane proteins mediating the interaction of human platelets. J. Cell Biol. 86, 77-86.

Kim H.R. et al. 2008. Cytoskeletal remodeling in differentiated vascular smooth muscle is actin isoform dependent and stimulus dependent. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 295, C768-C778.