精品视频一区二区三区 神奇的Ca2+荧光探针

钙离子浓度研究领域中常使用钙离子荧光探针与钙离子的特异性结合来观察细胞内钙离子浓度水平的变化，此类探针未结合Ca2+前几乎无荧光，结合Ca2+后，荧光强度显著增强，所显示光谱可被荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱法以及荧光酶标仪等多种方法检测。

常用的Ca2+荧光探针根据波长的不同，分为两大类：可见光激发Ca2+荧光探针和紫外光激发Ca2+荧光探针

*受欢迎的可见光激发Ca2+荧光探针：

1）Fluo-3 Fluo-3是*常用的可见光激发Ca2+荧光探针，较高的Ca2+结合力可捕捉细胞内Ca2+信号的动力学变化，使用于多种流式细胞术相关实验，如笼锁Ca2+螯合剂光活化、第二信使、神经传导物质研究以及细胞水平的药物筛选等。

2）Fluo-4 Fluo-4是钙指示剂Fluo-3的升级版本，主要变化为后者分子上的两个氯原子被Fluo-4上的氟所取代，该结构上的微小变化使Fluo-4,AM加载更快，在相同浓度下检测信号更强。

3）Rhod-2 Rhod-2是另一种可见光激发的高亲和力Ca2+指示剂，与其他可见光激发荧光探针如Fluo-3/4相比，Rhod-2具有长波长，更适用于检测具有较高自荧光现象的细胞和组织内钙离子水平以及检测由光感受器和笼锁Ca2+螯合剂光激活导致的钙离子释放。

1，钙离子荧光探针Rhod-2，货号：21060

2，CalbryteTM 590 乙酰氧甲酯，货号：20700

3，CalbryteTM 630 乙酰氧甲酯，货号：20720

Fura-2和Indo-1均属紫外激发Ca2+荧光指示剂，也是目前*常用的钙比率测量荧光探针。Fura-2是双激发波长荧光染料，Indo-1是双发射波长荧光染料，均采用比率测量方法，该方法可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。Fura-2特别适合于数字成像显微镜，使用该设备可更方便的调整激发波长，使探针结合钙离子后在300-400nm的激发波长范围内扫描Fura-2的吸收偏移，在510nm处检测发射波长。

相比之下，Indo-1更倾向于流式细胞术检测，使用该设备可实现在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长的激发，在400nm和480nm的波长处分别检测结合钙离子和未结合钙离子的荧光信号，通过二者的比值确定钙离子的浓度。Fura-2,AM和Indo-1,AM分别是Fura-2和Indo-1的乙酰氧甲酯（AM）衍生物，具有活细膜渗透性。

其他钙离子荧光探针：

腔肠素钙离子荧光探针和钙离子荧光探针Cal-500 与常规的荧光钙离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点: a.能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM； b.样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂；虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。 c.水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的钙离子监测 与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供*强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。