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营养肉汤培养基的灭菌方法
时间：2025-5-12
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营养肉汤培养基的灭菌方法主要是高压蒸汽灭菌法，以下从灭菌原理、操作步骤、注意事项、常见问题及解决方法等方面为你详细介绍：
高压蒸汽灭菌法利用高温高压的水蒸气来杀灭包括芽孢在内的所有微生物。在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，随着压力的升高，水的沸点也随之升高，从而使灭菌锅内的温度能够达到121℃甚至更高。在这样的高温环境下，微生物体内的蛋白质会发生不可逆的变性凝固，核酸结构被破坏，细胞膜的通透性增加，最终导致微生物死亡。
操作步骤
装载培养基
将分装好的营养肉汤培养基容器(如三角瓶、试管等)合理放置在高压蒸汽灭菌锅内。注意容器之间要留有一定的空隙，以保证蒸汽能够充分流通，使培养基均匀受热。
避免培养基容器堆放过于紧密，防止蒸汽无法穿透，导致灭菌不彻底。
加水
向灭菌锅内加入适量的水，水位一般要达到灭菌锅水位线指示的位置。加水过多可能会导致水进入培养基容器内，污染培养基；加水过少则可能在灭菌过程中因水分蒸发而使灭菌锅干烧，损坏设备。
关闭灭菌锅门
确保灭菌锅门密封良好，防止蒸汽泄漏。检查门上的密封圈是否完好，有无破损或老化现象。如果密封圈有问题，应及时更换。
设置灭菌参数
根据培养基的性质和灭菌要求，设置合适的灭菌温度和时间。对于营养肉汤培养基，通常灭菌温度设置为121℃，灭菌时间为15 - 30分钟。
一些灭菌锅还具有排气、保温等阶段的时间设置，需按照设备说明书进行准确设置。
启动灭菌程序
启动灭菌锅，开始加热。在加热过程中，灭菌锅会排出内部的冷空气，以保证锅内为纯蒸汽环境。当温度达到设定值后，开始计时灭菌。
灭菌结束与冷却
灭菌时间结束后，关闭灭菌锅电源，等待锅内压力自然下降至零。切勿在压力未降至零时强行打开灭菌锅门，否则会导致蒸汽喷出，造成人员烫伤，同时也会使外界空气进入锅内，污染培养基。
待压力降至零后，打开灭菌锅门，取出培养基。让培养基在室温下自然冷却，避免直接放入冷水中冷却，以免培养基容器因骤冷而破裂。