精品网站在线免费观看 ATCC细胞培养基操作技术分析
1.准备一个培养瓶,加入适宜细胞培养的培养基,液体体积按照说明书的推荐配置,并平衡培养基的温度和pH(CO2)。
2.在37℃水浴中或ATCC细胞的正常生长温度下将冻存管轻轻摇动。解冻要快,约2分钟或直到冰晶融化即可。
3.从水浴中取出冻存管并用浸泡或喷洒70%乙醇的方式来消毒。进一步的操作均需在无菌操作台中严格无菌条件下进行。
4.拧开冻存管的管帽并将内容物转移到一个含有9 ml推荐培养基的无菌离心管中。通过温和离心(125×g 10 min)除去冷冻保护剂(DMSO)。弃去上清,并用1或2 ml*培养基重悬细胞。将这些ATCC细胞悬液转移到含有*培养基的培养瓶中并轻轻摇动以*混匀。
5.培养24小时后检查细胞状态并在需要时进行传代。
某些细胞系,如杂交瘤细胞,需要几天的时间才能从冻存状态*复苏。某些杂交瘤细胞在培养的*天活力较差,并会产生细胞碎片。在此之后,细胞就会开始复苏,并进入指数增长。
某些ATCC细胞,是在培养瓶中以活细胞的形式运输的。这些培养瓶中会接种细胞,孵育并保证细胞能生长,然后补充满培养基后再运输。
在收到培养瓶后,目视检查培养基是否污染。包括异常的pH变化(苯酚红变为黄色或紫色),浑浊度,或有无颗粒。在低倍率(100×)的倒置显微镜下观察培养基中是否有微生物污染以及ATCC细胞的形态。
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