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和元李记(上海)生物技术...

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PEI转染试剂常见问题

阅读:5931      发布时间:2018-1-19
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QC4058L1080C4058L1090有什么区别?

A我们有两种,80是针对线性的,90是支链转染,比如慢性病包试剂用90比较好  

Q李记细胞转染液PEI固体自行配制溶液相比的优势在哪里?

A很多客户买固体很难把握的,固体非常不容易溶解,包装比较大,用的不多建议您选液体的,已做无菌处理,可以直接使用

Q接种细胞,必须用胶原酶消化?胰酶不能用么?

A胶原酶从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用,适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离但不受伤害。胶原酶消化的不是细胞表面,而是细胞间质。

         胰酶消化作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽腱,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。对细胞有轻微影响,进而影响后续转染效率及细胞活性,在一定程度上体现为转染试剂的毒性

Q使用方法提到,转染细胞时将复合物(40ul质粒稀释液+40ul 转染试剂稀释液)滴入到含细胞的培养皿中。此时含细胞的培养皿里面有含血清的培养基么?如果有,体积是多少?以24孔板为例,是0.5ml么?

A培养皿中培养基成分为正常培养细胞的成分,原来培养时有血清,那就有。培养孔中培养液的体积也是正常情况,你说的对,如果是24孔板,那么体积应该是0.5ml

Q:转染细胞步骤中提到,去除含复合物的培养液之后呢?要加含血清的培养基么?加多少,以24孔板为例?加完培养基后继续培养?培养多久?

A:去除含复合物的培养基,过程是逐步的,有两个目的,一是尽可能提高转染效率,二是尽可能降低细胞毒性。减少EZ Trans-DNA复合物的过程,也是恢复到细胞正常培养基成分的过程。后续培养多久,说明书为建议时间,你可以通过实验摸索,要根据你的转染效率,基因表达情况确定

Q:转染细胞步骤中提到,这里的7h,指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的7h,还是指加入复合物后转染7h?- 同样的,“24-48小时内检测转染效率”指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的24-48h,还是指加入复合物后转染24-48h

A:所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始.

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