上海申知心生物科技有限公司

主营产品: 高血脂症动物模型,心血管疾病动物模型,缺血性心脏病动物模型

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产物电泳实验步骤

2015-5-11  阅读(1828)

提 供 商 上海申知心生物科技有限公司 资料大小 12KB
资料图片 下载次数 230次
资料类型 WORD 文档 浏览次数 1828次
【详细说明】

实验材料和试剂
  (一)实验样品
  PCR扩增产物
  (二)试剂
  1.l DNA分子量标准 (天根生物科技有限公司)
    2.1mg/ml溴化乙锭溶液 (碧云天)
3.电泳缓冲液(TAE)(碧云天)
    40 mmol/L   Tris-乙酸
    1 mol/L     EDTA
4.2.5% 琼脂糖凝胶
(配制方法:称取琼脂糖2.5克,加入100ml TAE电泳缓冲液)
  (三)仪器
  微量移液器                天能电泳仪
  天能水平电泳槽            天能透射紫外观察仪

实验步骤
  1.选择合适的水平式电泳槽,调节电泳槽平面至水平。检查稳压电源与正负极的线路。
  2.选择孔径大小合适的点样梳子,垂直架在电泳胶模的一端,使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm。
  3.制备2.5%琼脂糖凝胶,100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀。
  4.用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好,防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透。待琼脂糖凝胶冷却至60℃左右时,加入一滴溴化乙锭,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中,琼脂糖凝胶的厚度在3~5mm。倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去。
  5.琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置20分钟,小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板,保持点样孔的完好。
  6.将电泳胶模放入电泳槽中,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1~2mm。如点样孔内有气泡,用吸管小心吸出,以免影响加样。
  7.将15ulDNA样品与1/5体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。上样缓冲液不仅可以提高样品的密度,使样品均匀沉到样品孔内,还可以使样品带颜色,便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置。
  8.用微量移液器将样品5ul小心加入加样孔内,记录样品点样秩序。
  9.盖上电泳槽,开启电源开关,高电压不超过5V/cm(100~150V恒压电泳),使DNA从负极向正极移动。
  10. 电泳1小时,电泳完毕后关闭电源,戴一次性塑料手套取出凝胶,尽可能将的电泳缓冲液淋干,在254nm波长的透射紫外灯下观察。




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