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冰冻切片

阅读:1541      发布时间:2015-7-15
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?  冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接切片。
?  在切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程。
–  缩短了制片时间
–  抗原性不受损失
?  对稳定性差的抗原,如淋巴细胞表面抗原尤其适合。

?  组织冻结过程中,细胞内、外的水分会形成冰晶,冻结的速度愈慢,冰晶颗粒愈大,可严重影响组织、细胞的形态结构。因此制备冻块时要求低温、速冻。

1、冰冻组织块的常用方法
?  液氮中冰冻:组织投入液氮中 (一196?C)中10~20sec;
?  干冰中加入丙酮(或异戊烷),液体立即气化起泡,温度降至一70?C ,将组织投入,若在干冰丙酮中置一盛有异戊烷的容器,组织投入该容器内结冻则更好;
–  上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内,以保护组织。
–  制成冻块后若需保存,应以铝箔或塑料薄膜封包,贮存于-70 ?C冰箱。

2、切片
?  供免疫组化用的冰冻切片同样要求附贴平整,并有连续性。
?  载玻片也应清洁无油污,但一般无需涂抹粘附剂;
?  切片时,使用恒温冷冻切片机,在箱内温度-25 ?C 。切片厚度一般为4~8?m。

3、切片后处理
?  切好的冰冻切片,室温下自然晾干1~2h后,入4?C丙酮固定10min,待干燥后作免疫组化染色或封存于-20℃。细胞
?  由于切片技术要求较高,不易得到连续性很好的切片,其形态结构亦不如石蜡片,且冻块和切片不便于长期贮存,因此的应用受限。

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