基本原理

 细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。

 体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。

试剂和设备

  细胞悬浮液； 

  6孔平底组织培养板，或φ60 mm培养皿； 

  18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的盖玻片； 

  含血清培养基（通常为 RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素）； 

  超净工作台； 

  CO2孵箱； 

  盖片镊；

操作步骤

  1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

  2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

  3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

  4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 

  5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

注意事项

  1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

  2．所使用的盖玻片应该为玻璃制造，并经过铬酸洗液处理； 

  3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

  4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

  5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

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