精品视频一区二区三区 美国Bio-rad关于生物分子纯化的一些指南

生物分子纯化指南

■抗体纯化

★单抗药物采用 UNOsphere SUPrA 亲和介质进行捕获，UNOsphere 离子交换中间纯化，最后用CHT 陶瓷羟基磷灰石进行精纯，该生产工艺可直接得到高纯度的抗体，并能zui有效的去除宿主蛋白、聚合体、DNA 和内毒素。

★Affi-Gel 和Affi-Prep Protein A 介质上偶联的Protein A 可与免疫球蛋白的Fc 链结合，能有效纯化各种来源的抗体，包括血清，腹水和培养液等。并且与哺乳动物IgG 具有更高的亲和性。

★DEAE/CM Affi-Gel 蓝胶：双配基功能亲和凝胶，其中共价结合的Cibacron blue F3GA 染料配基可以结合白蛋白、蛋白酶和其他补体蛋白；DEAE 或CM 在不同条件下能有效结合IgG。因此同样可以一步纯化血清和腹水中的IgG，并且洗脱液中无蛋白酶活性，是Protein A 的经济替代品。

★Macro-Prep High Q 和High S 两步离子交换策略非常便于IgM 的纯化，纯度可达95%以上。

■抗原纯化

★Affi-Gel Hz 活化载体通过结合抗体分子Fc 链的碳水化合物部分，可以实现对IgG 分子的定向耦联，这种结合产生更特异的抗原-抗体作用，比其他介质高出100-300%的抗原结合量。

■重组蛋白纯化

★Profinity IMAC 介质是一种用于分离带有 His-Tag 标签的重组蛋白的金属螯合介质。Profinity IMAC 以最新的UNOsphere 为基质，IDA 配基螯合金属Ni，具有高流速，高载量，高分辨率的特点，可一步纯化His 标签的重组蛋白。

★Profinity GST 预装柱是在UNOsphere 基质偶联了谷胱甘肽衍生物，可以与谷胱甘肽转移酶结合，用于纯化带有GST标签的重组蛋白。同样具有高流速，高载量，高分辨率的特点。

★Profinity eXact 融合标签系统是基于亲和标签纯化蛋白质的系统，用以解决在其他亲和标签系统中普遍存在的标签去除的瓶颈。耦联在琼脂糖基质中的枯草杆菌蛋白酶可以特异性地识别枯草杆菌蛋白酶原的N 端前结构域75 个氨基酸的标签序列。利用含氟的洗脱缓冲液引发了枯草杆菌蛋白酶的酶切活性，可以快速而精确的从融合蛋白质中切下融合的标签，同时释放出纯化的目标蛋白。

★不带标签的普通重组蛋白可采用UNOsphere 离子交换介质捕获，陶瓷羟基磷灰石，氟代磷灰石CFT，Macro-Prep 离子交换或疏水作为中间纯化或精纯的策略，其中UNOsphere Q/S 具有高流速高载量低反压的特点，能有效的进行样品的粗分离；陶瓷羟基磷灰石对样品中的盐不敏感，样品无需脱盐即可直接上样，可单独用磷酸盐浓度单梯度洗脱，也可以先用氯化钠浓度梯度洗脱，再用磷酸盐梯度洗脱的双梯度洗脱模式，从而达到更高的分辨率。

■包涵体蛋白纯化

★包涵体溶于8M 尿素或6M 盐酸胍中，可直接上样于高化学稳定性的UNOsphere、Macro-Prep 离子交换介质进行纯化，也可以用陶瓷羟基磷灰石I 型纯化。对于含His 标记的重组包涵体，可用Profinity IMAC 金属螯合快速捕获并一步纯化，或者进行柱上复性同步纯化。

■酶的纯化

★UNOsphere 离子交换，Macro-Prep 离子交换和疏水，羟基磷灰石都能有效分离纯化各种酶，其中羟基磷灰石和Macro-Prep DEAE/CM 对酶的吸附更加温和，不影响酶的活性。

★Bio-Rex 70 弱阳离子交换树脂可提供更高的载量，更温和的吸附作用，并支持在位再生和清洗。

■硫酸铵沉淀样品的纯化

★沉淀样品直接上Macro-Prep 甲基或丁基疏水，洗脱组分再上陶瓷羟基磷灰石进行双梯度洗脱精纯，或上离子交换进行精纯。

★先以Bio-Gel P-6DG 脱盐，再上离子交换单梯度洗脱或陶瓷羟基磷灰石双梯度洗脱。

■寡糖、多糖和多糖肽的纯化

★Bio-Gel P-2, P-4, P-6 和P-10 等可以高分辨率纯化寡糖和多糖，以聚丙烯酰胺为基质，不会与糖形成多氢键非特异性吸附，可获得最高得率。

★Macro-Prep DEAE/CM/High Q 和High S 离子交换以聚苯乙烯二乙烯为基质，可用于纯化多糖和多糖肽，分辨率高，无非特异性吸附。

■去除内毒素

★Macro-Prep 离子交换和陶瓷羟基磷灰石都能有效去除内毒素，是一种高效、经济的选择。

★Affi-Prep 多粘菌素亲和介质可结合来自许多革兰氏阴性菌的内毒素，具备很高的去除率，线性流速可达2000cm/hr，70bar的耐受压力，可在分析级和工业级等规模上应用。

■耦联活化亲和纯化

★Profinity 环氧化物介质可固化含有氨基、硫醇、羟基等基团的亲核配基，耦联后可有效纯化蛋白质，糖类和DNA 等，例如耦联Protein A 以纯化单抗，耦联麦芽糖结合蛋白和钙调蛋白配基可有效纯化重组蛋白。该介质以UNOsphere为基质具有*的物理强度􀉺高流速、低反压的大孔结构，可以在很高的流速下操作，使得生产效率得以提高。

★Affi-Gel 10 可有效耦联pI 6.5-11 的中性或碱性蛋白，Affi-Gel 15 用于耦联pI<6.5 的酸性蛋白，蛋白偶联量为35mg/ml 凝胶。

★Affi-Gel Hz 活化载体通过结合抗体分子的Fc 段的碳水化合物部分实现对IgG 分子的的定向耦联抗体，，这种结合产生更特异的抗原和抗体作用，比其他介质高出100-300%的抗原结合量。

★Affi-Gel 102 碳二亚胺活化亲和介质能耦联含初端或末端羧基的配体，可以提供经济灵活的化学选择。

■核酸和病毒纯化

★CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型对超螺旋DNA 和线性DNA，双链DNA 和单链DNA 具有ji高的分辨率，也能有效分离纯化病毒。

★基因治疗用病毒载体（如腺病毒等）用UNOsphere S 和Q 两步纯化可获得最佳的纯度和得率，而且容易规模放大。

★Chelex 100 分子生物学级树脂用于缓冲液和离子试剂的超纯化，可有效去除DNA 样品中影响测序和PCR 反应的各种金属污染物，也可去除各种生物样品的金属污染物。

★AG 50W-X8 阳离子交换树脂可有效去除DNA 样品中的溴化乙锭和碘化丙锭的污染。

■去除蛋白质样品中核酸

★CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型在中性pH 下对核酸有效吸附，而对蛋白质吸附较弱，用一定的磷酸盐浓度梯度可有效去除蛋白样品中绝大部分核酸。

★UNOsphere S 和Macro-Prep High S 和CM 都能有效结合带正电的目标蛋白，而让核酸流穿过从而去除大部分核酸。

★UNOspherer Q 和Macro-Prep High Q 和DEAE 对核酸具有很高的结合能力，在缓冲液的pH 值低于目标蛋白等电点的情况下使目的蛋白流穿，可以高效的去处蛋白质样品中的核酸。

■样品的脱盐

★蛋白质，核酸等生物大分子的脱盐可采用Bio-Gel P-6DG。

★AG501-X8 可用于水或其他非离子物质的去离子和脱，AG11 A8 混合床树脂可从蛋白样品中去除SDS 和游离的荧光染料，并可从氨基酸中去除无机盐。

■小量和微量蛋白质精纯

★UNO Q/S Monolith，采用连续床技术，高流速，超高分辨率，10 分钟内分离4 个蛋白质

■中草药与天然产物活性成分的纯化

亲水性活性成分

★UNOsphere 或Macro-Prep 阴阳离子交换能有效分离其中的生物酸、生物碱、皂甙等组分。

★Affi-Gel 硼胶对含邻、顺、式羟基的化合物具有高亲和力和高载量，可高效分离糖，糖肽，核苷酸，核苷，儿茶酚胺等小分子化合物。

★具有小分子量排阻范围的凝胶过滤层析Bio-Gel P-2、P-4、P-6 和P-10 等能以分子排阻模式有效分离各种水溶性小分子物质，分辨率ji高。

★AG1、AG2 和AG50 等分析级树脂可以分离各种小分子有机物，如各种有机酸、磷酸肌醇、氨基酸、小肽、核苷酸等。

亲脂性活性成分

★Bio-Beads S-X 介质是中性，多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球体，用于亲脂性多聚物和有机洗脱溶质的分子量排阻层析，含分子量0-400，0-1000，0-2000 和600-14,000等各种不同排阻范围，具有ji高的分辨率，兼容几乎所有的有机溶剂，包括各种芳香族、卤代烷等溶剂。可用于分离天然产物中亲脂性的物质，环境中的各种污染物如杀虫剂、灭鼠剂、多环芳香化合物和不饱和酯类等。

■单糖、寡糖、糖醇和有机酸的分析

★Aminex HPLC 分析柱，由聚苯乙烯二乙烯苯树脂填装而成的 Aminex HPLC 柱，具有良好的高压及 pH 稳定性、高柱效和选择性。通过离子调节分配层析技术分离混合物，根据多种不同的化学特性分离分子，其分离机制包括离子排阻、离子交换、正相和反相分配、分子量排阻和配体交换等多重机制分离。根据层析的物理和化学性质，可选择使用一个或者多个分离机制。Aminex 是工业界和分析实验室zui普遍使用的用于分析碳水化合物、有机酸、醇、糖醇、有机碱和其它包括肽和核苷酸的有机小分子的分析高效液相色谱柱。