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CRISPR/Cas9 质粒-New

阅读:3054      发布时间:2015-10-27
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Santa Cruz 新品- CRISPR/Cas9 质粒-New

CRISPR/Cas9基因敲除质粒

1)每个Knockout 质粒产品设计为3个质粒,确保对特定基因识别和剪切效率达到zui大。每个质粒编码*的20个核苷酸,序列来自GeCKO文库。

2Cas9/gRNA 复合体与靶DNA PAMNGG)位点结合,并解旋DNA

gRNAPAM位点附件的靶位点特异结合。

3)通过3gRNA的向导,Cas93个特定位点对目的基因的5’外显子进行剪切。

二、HDR 同源修复质粒

1)每个HDR产品包含了3种质粒,这三种质粒对相应的CRISPR/Cas9敲除质粒导致的缺口特异性修复。

2HDR质粒为DSB提供特定的修复模板

3)每个HDR质粒包含两个800碱基对同源臂,可特异的与相应的cas9诱导的双链DNA破坏位点周围的基因组DNA结合。

4)与敲除质粒共转染时,HDR质粒的puro基因,用于筛选稳定的敲除克隆。

5)每个嘌呤霉素抗性基因两侧各有一个Loxp位点,便于Cre载体进一步处理。

三、双切口酶质粒(Double Nickase Plasmids

1)每个双切口酶质粒由一对各自编码 D10A突变型Cas9核酸酶和特异性20nt 组成,与CRISPR/Cas9敲除质粒相比,具有更高的特异性。

2)成对gRNA序列设计为大约5-20个碱基对的偏移,所形成的DNA双切口被识别为功能性双链断裂。

3)每个casn/sgNA复合物在与向导RNA互补的DNA链仅产生一个切口。

4)使用成对的向导RNA可提高特异性且可zui低化脱靶效应。

四、CRISPR/dCas 激活质粒

1)用于激活內源基因的表达。包含三种质粒,几个修饰组件形成协同激活介质(SAM)复合体,这个SAM复合体代表了迄今为止,zui有效的转录激活系统。

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