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基质胶应用(1) —皮下成瘤实验全攻略
2025-5-28 阅读(98)
导 语
想评估抗癌药物疗效？研究肿瘤生长机制？皮下成瘤实验是肿瘤研究中的经典模型！但如何规范操作确保实验成功率？需要哪些关键试剂？本文为您一一解析！
皮下成瘤（Subcutaneous Tumorigenesis）是将肿瘤细胞接种到小鼠皮下，模拟肿瘤生长和转移的体内实验模型。因其操作简便、成瘤周期短、可视化强，被广泛用于：
✅ 抗肿瘤药物疗效评价；
✅ 肿瘤发生机制研究；
✅ 免疫治疗及基因治疗开发。
准备对数期生长的、细胞密度达80 - 90%左右的HepG2细胞，于收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
胰酶消化细胞，待细胞变圆未脱离培养皿时，去除胰酶，加入PBS/无血清培养基制成细胞悬液，离心清洗一次，重悬至终浓度为1×108个细胞/mL。
将细胞悬液和Ceturegel™高浓度基质胶在4℃环境下按1:1比例进行稀释，制备成终浓度为5×107个细胞/mL（Ceturegel™基础浓度基质胶建议浓度在70%以上）。
左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩处皮下注射，接种时，针头在皮下进针深一点，约1 cm深，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出，接种体积为200 μL。(这一过程尽量在半小时内完成，途中细胞悬液放在冰上以减缓细胞凋亡及防止出现凝胶现象）。
将裸鼠放回笼内继续饲养，1周~1月左右可看到肿瘤出现，并根据实验设计在肿瘤体积达到要求时对裸鼠进行安乐si，并拍照。
常见的荷瘤不成功可能的原因？
① 细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达 80 - 90% 左右密度为宜，收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
② 可能是小鼠周龄太大，一般选择 4 - 6 周龄裸鼠，小于 4 周可能不耐受过早死亡，大于 6 周免疫力会增强，不易成瘤。
③ 可能是小鼠免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠。
④ 接种部位也是成瘤实验的重要因素。选择血管丰富且易操作的部位接种，如腋下、腹股沟、侧腹部及颈背部等部位，其中腋下中后部皮下较好，成瘤率高，比较推荐打腋下，一人操作很方便，后续量瘤子也很好操作。
肿瘤长起来后又消失的原因？
肿瘤生长过程中，如果出现肿瘤块先缩小，后变大的现象，很可能是由于炎症反应，肿瘤细胞被小鼠自身吸收造成的。继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来，如若后续肿瘤依旧未长出来，可考虑更换免疫缺陷程度更大的小鼠。
产品名称 | 货号 | 规格 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶 | 40183ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free基质胶 | 40187ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL |
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red胰酶溶液（0.25%），含酚红 | 40126ES | 100 mL |
PBS(1×)细胞培养级 | 41403ES | 500 mL |
